Книги
чёрным по белому
Главное меню
Главная О нас Добавить материал Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Археология Архитектура Бизнес Биология Ветеринария Военная промышленность География Геология Гороскоп Дизайн Журналы Инженерия Информационные ресурсы Искусство История Компьютерная литература Криптология Кулинария Культура Лингвистика Математика Медицина Менеджмент Металлургия Минералогия Музыка Научная литература Нумизматика Образование Охота Педагогика Политика Промышленные производства Психология Путеводители Религия Рыбалка Садоводство Саморазвитие Семиотика Социология Спорт Столярное дело Строительство Техника Туризм Фантастика Физика Футурология Химия Художественная литература Экология Экономика Электроника Энергетика Этика Юриспруденция
Новые книги
Суворов С. "Танк Т-64. Первенец танков 2-го поколения " (Военная промышленность)

Фогль Б. "101 вопрос, который задала бы ваша кошка своему ветеринару если бы умела говорить" (Ветеринария)

Нестеров В.А. "Основы проэктирования ракет класса воздух- воздух и авиационных катапульных установок для них" (Военная промышленность)

Таранина И.В. "Гражданский процесс в схемах " (Юриспруденция)

Смоленский М.Б. "Адвокатская деятельность и адвокатура российской федерации" (Юриспруденция)
Реклама

Хроматографические материалы - Лурье А.А.

Лурье А.А. Хроматографические материалы: Справочник — М.: Химия, 1978. — 440 c.
Скачать (прямая ссылка): hromatograficheskiemateriali1978.djvu
Предыдущая << 1 .. 14 15 16 17 18 19 < 20 > 21 22 23 24 25 26 .. 32 >> Следующая

Разделение веществ методом ГПХ не связано с сорбцией в буквальном смысле (хотя в более широком смысле основной процесс на гелях можно рассматривать как абсорбцию). Скорость движения компонентов смеси по колонке зависит от,того, насколько проницаем внутренний объем гранул для разделяемых молекул. Не разделяются (в пределах своей группы) вещества с молекулами крупнее так называемого предела эксклюзии (порога проницаемости) и вещества с очень мелкими молекулами, которые беспрепятственно проникают в гель. Первые проходят через колонку быстрее всех (их удерживаемый объем равен свободному, или транспортному, объему колонки Ум), вторые задерживаются в колонке и выходят из нее последними, так как проходят наибольший путь, включая путь во внутреннем объеме зерен. Для каждого из гелей имеется область ограниченной проницаемости, в пределах которой скорость элюирования зависит от размера молекул (для однотипных молекул объем удерживания обратно пропорционален логарифму молекулярной массы). Вещества, молекулярные массы которых различаются на 10—25%, могут быть разделены методом ГПХ.
Предел эксклюзин геля определяют по графику зависимости элюируемого объема от молекулярной массы, он соответствует элюируемому объему, который на 10% отличается от свободного объема Vm,т. е- объема растворителя вне зерен геля (Удя определяют по выходу высокомолекулярного вещества, заведомо не проникающего в гель). Предел эксклюзии в некоторой мере зависит и от формы молекул: для линейных полисахаридных молекул предел эксклюзии ниже, чем для глобулярных белков. Точность определения молекулярной массы белков методом ГПХ возрастает, если добавлением карбамида, гуанидина или SDS (додецилсульфата натрия) глобулярные молекулы белков перевести в вытянутую форму.
Сефадексы — типичные мягкие гели. Они характеризуются большой проницаемостью, высокой эффективностью разделения и высокой емкостью. Фактор емкости Vs/Vjvi (отношение объемов растворителя внутри геля и вне его) равен 2—3. Недостаток — сильная сжимаемость, особенно у сильно набухающих сефадексов. Под давлением жидкости слой в колонке может деформироваться, вследствие чего скорость фильтрации приходится существенно ограничивать.
При фракционировании веществ методом ГПХ загрузка сефадекса раствором пробы достигает 1—4% от объема набивки в колонке. Элюирование всех компонентов смеси обычно заканчивается при прохождении через колонку объема элюента, равного полному объему набивки. Ожидаемое разбавление вещества в элюате — 5—20-кратное. ГПХ на сефадексах — исключительно мягкий метод разделения веществ, очень редко приводящий к денатурации лабильных соединений. Выход вещества, если нет специфической адсорбции, приближается к 100?о.
Сефадексы очень часто применяют для обессоливання, т. е. группового фракционирования смеси, позволяющего отделить высокомолекулярное вещество от низкомолекулярных примесей. При обессоливании загрузка колонок раствором составляет обычно 10—25% (иногда до 30—40%) от объема набивки, независимо от концентрации вещества в растворе. Одно из важных преимуществ обессоливання на сефадексах и других подобных гелях — высокая скорость. Разбавление основного вещества в элюате можно свести к минимуму (до 1,25).
Сефадексы набухают и, следовательно, могут быть использованы в водных, водно-спиртовых растворах и некоторых органических растворителях: диметил-сульфоксиде, формачиде (слабо набухающие геля—• также в диметилформамцде). Специально для работы в полярных органических растворителях (см. разд. 39) предназначен липофильный сефадекс LH-20, который получают введением в матрицу оксипропиловых групп (производится с 1966 г.).
Применяют сефадексы для фракционирования высокомолекулярных веществ (вплоть до вирусов), очистки и обессоливання биологических субстратов, фрак-
56
»ционирования полимеров и аналитического определения молекулярной массы. Специфические применения — отделение избытка метчнка от меченых высокомолекулярных веществ после введения радиоактивной метки, отделение несвязанных молекул красителя после приготовления флуоресцирующих антител. Липофильный сефадекс LH-20 применяют для ГПХ и адсорбционной хроматографии при разделении липидов, стероидов, ароматических и циклических соединений и других высокомолекулярных веществ.
В настоящее время все сефадексы вырабатывают в микросферической, бисерной форме (раньше их выпускали в виде гранул произвольной формы). Рекомендуется применять «грубые» гели (100—300 мкм) для промышленных целей, концентрирования растворов высокомолекулярных веществ (с' помощью сухих гелей) и быстрого обессоливания неустойчивых веществ-, «средние» (50—150 мкм) — для препаративных целей, обессоливания и массовых анализов; «тонкие» (20— 80 мкм) — для лабораторных исследований и «сверхтонкие» (10—40 мкм) —для ТСХ или для ГПХ с наивысшим разрешением.
29. Агарозные гранулированные гели (табл. на стр. 60)
Разработаны Хьёртеном в 1964 г. (Н [ е г t ё п S., Biochim. Biophys. Acta, 1964, v. 79, No. 2, p. 393—398). Гранулированный гель образуется в результате связывания водородными мостиками цепей агарозы (полисахарида на основе галактозы): [—О—С5НьО (ОН)2 (СН2ОН)—О—С6Н702 (ОН)—1л- Приготовляют гели из высокоочищенной агарозы — нейтрального компонента агара. Адсорбционная активность гелей крайне низка. Агарозные гели хими1чески малоустойчивы. Их структура нарушается в присутствии гуанидина или карбамида в больших концентрациях (особенно в случае геля с 2% агарозы и ниже). Не рекомендуется использовать органические растворители (хлороформ, толуол), сильные окислители, боратные буферные растворы. Бораты образуют комплексы с ОН-группами, что приводит к изменению хроматографических характеристик геля. Время нахождения гелей в 0,1 М растворах NaOH или НС1 ие должно превышать 2— 3 ч. Рабочая область pH лежит в пределах от 4 до 9—10, оптимальная область pH — от 5 до 8.
Предыдущая << 1 .. 14 15 16 17 18 19 < 20 > 21 22 23 24 25 26 .. 32 >> Следующая