Книги
чёрным по белому
Главное меню
Главная О нас Добавить материал Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Археология Архитектура Бизнес Биология Ветеринария Военная промышленность География Геология Гороскоп Дизайн Журналы Инженерия Информационные ресурсы Искусство История Компьютерная литература Криптология Кулинария Культура Лингвистика Математика Медицина Менеджмент Металлургия Минералогия Музыка Научная литература Нумизматика Образование Охота Педагогика Политика Промышленные производства Психология Путеводители Религия Рыбалка Садоводство Саморазвитие Семиотика Социология Спорт Столярное дело Строительство Техника Туризм Фантастика Физика Футурология Химия Художественная литература Экология Экономика Электроника Энергетика Этика Юриспруденция
Новые книги
Цуканов Б.И. "Время в психике человека" (Медицина)

Суворов С. "Танк Т-64. Первенец танков 2-го поколения " (Военная промышленность)

Нестеров В.А. "Основы проэктирования ракет класса воздух- воздух и авиационных катапульных установок для них" (Военная промышленность)

Фогль Б. "101 вопрос, который задала бы ваша кошка своему ветеринару если бы умела говорить" (Ветеринария)

Яблоков Н.П. "Криминалистика" (Юриспруденция)
Реклама

Основы учения об антибиотиках - Егоров Н.С.

Егоров Н.С. Основы учения об антибиотиках — М.: Наука, 2004. — 528 c.
ISBN 5-211-04669-2
Скачать (прямая ссылка): osnoviucheniyaobantibiotikah2004.djvu
Предыдущая << 1 .. 51 52 53 54 55 56 < 57 > 58 59 60 61 62 63 .. 212 >> Следующая

Цветом еще в 1903 г. и теперь очень широко используемый в лабораторной
практике. Метод особенно важен при идентификации антибиотиков на ранних
стадиях исследования.
Иногда метод хроматографии необходимо дополнить данными методов
электрофореза, которые помогают выяснить прежде всего ионный характер
антибиотика.
Метод бумажной хроматографии антибиотиков состоит в следующем. На полоски
хроматографической бумаги длиной 20-30 см и шириной 1 см наносят
испытуемый антибиотик. Подсушенные на воздухе полоски с антибиотиком
помещают затем в хроматографический бак или цилиндр с соответствующим
растворителем на 10-20 ч. Время выбирают в зависимости от скорости
прохождения растворителя и от высоты используемого для хроматографии
сосуда.
Для обнаружения антибиотиков на хроматограммах применяют биологические,
химические и физические методы.
137
Наиболее распространенным методом обнаружения антибиотиков на
хроматограммах является биоавтографический метод. При этом высушенные в
вытяжном шкафу полоски бумаги накладывают на агаровую пластинку,
предварительно засеянную культурой тест-организма, чувствительной к
изучаемому антибиотику. Кюветы с полосками бумаги помещают в термостат на
18-20 ч при температуре, оптимальной для роста тест-организма. По зонам
отсутствия роста тест-микроба, образующимся вокруг тех мест на
хроматограмме, где находится пятно антибиотика, во-первых, судят об
однородности антибиотика, во-вторых, сравнивают полученные хроматограммы
с хроматограммами известных антибиотических веществ (рис. 12).
Химические методы обнаружения антибиотиков на хроматограммах основаны на
реакциях, в результате которых образуются соединения, выявляемые по
соответствующей окраске или обесцвечиванию реактива в месте расположения
пятна антибиотика. Физические методы обнаружения антибиотиков включают
способы, связанные: а) с выявлением люминесценции антибиотического пятна
при воздействии УФ-излучения; б) с поглощением УФ-излучения и в) с
определением радиоактивной метки антибиотика.
Для целей бумажной хроматографии антибиотиков с успехом используют и
круговые хроматограммы.
Важное значение при оценке результатов хроматографии имеет положение
пятен исследуемых веществ, характеризуемое коэффициентом Rf. Коэффициент
определяется отношением расстояния, которое проходит пятно изучаемого
вещества от линии старта за определенное время, к расстоянию, пройденному
фронтом растворителя от линии старта. Воспроизводимость значений Rf
зависит от постоянства следующих факторов: качества бумаги, температуры,
степени чистоты растворителей, состава газов атмосферы, в которую
помещена бумага, однотипности процедур и аппаратуры.
При использовании метода хроматографии на бумаге для идентификации
антибиотиков было показано, что значение Rf зависит также от системы
растворителей, степени очистки изучаемого антибиотика и состава
культуральной жидкости.
По спектру значений Rf, или, как его иногда называют, по
хроматографическому спектру*, можно четко различать группы химически
родственных антибиотиков и до некоторой степени отличать также
антибиотики внутри групп (рис. 13).
* Хроматографический спектр представляет собой ломаную линию,
характеризующую подвижность антибиотика при хроматографировании с
использованием определенного набора систем растворителей.
138
Существенное значение при использовании бумажной хроматографии для
идентификации антибиотиков имеет разработка методов, позволяющих
проводить эти исследования на ранних этапах изучения антибиотических
веществ, т.е. на стадии культуральных жидкостей.
Однако при этом сильно затрудняется разгонка антибиотиков, так как
факторы, влияющие на значение Rf, часто встречаются при использовании
культуральных жидкостей.
Rf
0,8
0,6
0,4
0,2
0,8
0,6
0,4
0,2
О,В 0,6 0,4 0,2
0,8
0,6
0,4
0,2
0,8
0,6
0,4
0.2
- Оке и те трациклин /¦ -V "Л/ Новобиоцин V
wi i i i i i Эритромицин
- Тетрациклин ЦиклосеринГЛ /V V
Стрептомицин LJV Альбома- "_А
- Неомицин д ¦i-n-rV.V. I 1 1 1 1 1 1 1
12 3 4 5 6 7 8 12 3 4 5 6 7 8
Растворители
Рис. 13. Хроматографические спектры некоторых известных антибиотиков (по
Доскачиловой и Вондрачек, 1961)
Рис. 12. Использование метода бумажной хроматографии для разделения
пенициллинов, образуемых Penicillium chrysogenum (штамм Q-
176) при развитии на кукурузной среде с лактозой. А - стандартный раствор
бензилпенициллина; Б, В - хроматотраммы производственных образцов 1950
г.; Г- хроматограмма конечного препарата калиевой соли (1950) (по
Герольду, 1957). За пятном бензилпенициллина (вверху) следуют: пенициллин
F, дигидро F и
самая нижняя зона - пенициллин К
Преодолеть эти затруднения удалось с помощью методов лио-филизации
фильтратов культуральных жидкостей и экстрагирования их соответствующими
растворителями. Сущность схемы хроматографической идентификации
антибиотиков из культур на стадии малоактивных культуральных жидкостей
состоит в следующем.
Культуральную жидкость с антибиотическими свойствами фильтруют и измеряют
Предыдущая << 1 .. 51 52 53 54 55 56 < 57 > 58 59 60 61 62 63 .. 212 >> Следующая