Книги
чёрным по белому
Главное меню
Главная О нас Добавить материал Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Археология Архитектура Бизнес Биология Ветеринария Военная промышленность География Геология Гороскоп Дизайн Журналы Инженерия Информационные ресурсы Искусство История Компьютерная литература Криптология Кулинария Культура Лингвистика Математика Медицина Менеджмент Металлургия Минералогия Музыка Научная литература Нумизматика Образование Охота Педагогика Политика Промышленные производства Психология Путеводители Религия Рыбалка Садоводство Саморазвитие Семиотика Социология Спорт Столярное дело Строительство Техника Туризм Фантастика Физика Футурология Химия Художественная литература Экология Экономика Электроника Энергетика Этика Юриспруденция
Новые книги
Цуканов Б.И. "Время в психике человека" (Медицина)

Суворов С. "Танк Т-64. Первенец танков 2-го поколения " (Военная промышленность)

Нестеров В.А. "Основы проэктирования ракет класса воздух- воздух и авиационных катапульных установок для них" (Военная промышленность)

Фогль Б. "101 вопрос, который задала бы ваша кошка своему ветеринару если бы умела говорить" (Ветеринария)

Яблоков Н.П. "Криминалистика" (Юриспруденция)
Реклама

Основы учения об антибиотиках - Егоров Н.С.

Егоров Н.С. Основы учения об антибиотиках — М.: Наука, 2004. — 528 c.
ISBN 5-211-04669-2
Скачать (прямая ссылка): osnoviucheniyaobantibiotikah2004.djvu
Предыдущая << 1 .. 55 56 57 58 59 60 < 61 > 62 63 64 65 66 67 .. 212 >> Следующая

изменчивости, 2) индуцированного мутагенеза и ступенчатого отбора
наиболее активных форм продуцентов антибиотиков, 3) генно-инженерных
манипуляций. Для выделенных штаммов должны быть изучены условия
культивирования полученных вариантов в целях определения наиболее
оптимальной биосинтетической активности.
МЕТОД ЕСТЕСТВЕННОЙ ИЗМЕНЧИВОСТИ МИКРООРГАНИЗМОВ
В селекционной работе по получению активных продуцентов антибиотических
веществ используют приемы, основу которых составляют методы и законы
генетики.
Прежде всего при изучении вновь выделенных продуцентов антибиотиков
стремятся отобрать наиболее активные варианты, имеющиеся в культуре.
Микроорганизмы, относящиеся к одному клону (клон - это генетически
однородное потомство, образовавшееся из одной клетки), обладают
естественной изменчивостью, т.е. среди клеток или спор одного и того же
клона могут обнаружиться формы, отличающиеся по морфологическим или
биохимическим, в том числе и антибиотическим, признакам. При этом
клоновая культура микроорганизма превращается в генетически разнородную
популяцию.
Разберем метод отбора наиболее активных антибиотикообразующих вариантов
микроба, полученных в результате естественной изменчивости.
Популяцию клеток продуцента высевают на пластинку питательного агара в
чашке Петри с таким расчетом, чтобы на ней получалось не более 40-50
изолированных колоний. После достаточно хорошего развития колоний
проверяют их способность к образованию антибиотика (в основном двумя
способами).
146
Первый способ. Выросшие колонии заливают расплавленным и охлажденным до
50-55 °С питательным агаром, содержащим тест-организм, чувствительный к
изучаемому антибиотику. Затем чашки на 20-24 ч помещают в термостат при
температуре, оптимальной для развития тест-культуры. За это время вокруг
колоний образуются зоны отсутствия роста тест-организма. Размеры диаметра
зон отсутствия роста вокруг колоний микроорганизма различны. Чем
интенсивнее колония образует антибиотик, тем больше зона отсутствия роста
тест-организма. Такие наиболее активные колонии легко обнаружить (рис.
14).
Рис. 14. Схема опыта по определению антибиотической активности колоний
микроорганизмов методом заливки их питательным агаром, содержащим тест-
организм: 1 - питательный агар с тест-организмом, 2 - питательный агар
для развития колоний продуцента антибиотика, 3 - колония, 4 - зона
дуффузии антибиотика
Для выявления изменчивости, связанной с образованием антибиотиков у
бактериальных организмов (споровых), на колонии перед заливкой
расплавленного агара можно помещать стерильные диски фильтровальной
бумаги, диаметр которых равен внутреннему диаметру чашки Петри. Таким
диском фильтровальной бумаги прикрываются выросшие колонии бактерий, а
расплавленный агар наливается на поверхность бумажного диска. Это
облегчает последующее выделение наиболее активной колонии в чистом виде.
Для более объективного решения вопроса о возможности образования
антибиотического вещества выросшими колониями иногда используют другой
способ.
Второй способ. Подготавливают чашки Петри с питательным агаром,
поверхность агаровой пластинки засевают тест-организмом. Затем в толще
агаровой пластинки с помощью пробочного сверла или другого подобного
приспособления делают лунки диаметром 6-8 мм. Из центра колонии
изучаемого микроба вырезают агаровый блочок пробочным сверлом с
внутренним диаметром, равным диаметру лунок. Агаровый блочок вставляют в
лунку. На каждой чашке может быть сделано 6-7 лунок и, следовательно,
испытано 6-7 различных колоний. Чашки с блочками, помещенными в лунки,
переносят в термостат на 20-24 ч, после чего измеряют диаметры зон вокруг
блочков. Чем больше диаметр зоны задержки роста тест-организма, тем
активнее колония изучаемого организма.
147
При селекции наиболее активных штаммов продуцентов ряда антибиотиков,
выделенных из естественных мест их обитания, используют среды, содержащие
те же антибиотические вещества. Например, для выделения из почвы наиболее
активных штаммов продуцента стрептомицина в агаровую среду, используемую
для их высева, добавляют определенную концентрацию стрептомицина. Штаммы
S. griseus, образующие большие количества антибиотика, способны
выдерживать такую концентрацию стрептомицина и нормально развиваться в
его присутствии. Менее активные штаммы не приспособлены к высоким
концентрациям стрептомицина и в его присутствии не развиваются.
В питательную агаровую среду вносили стрептомицин в количестве 100 мкг/мл
субстрата, а затем высевали выделенные штаммы стрептомицетов, относящиеся
к S. griseus. В результате бактерии, чувствительные к этой концентрации
стрептомицина, не развивались примерно в 80% случаев. Остальные 20%
штаммов, среди которых были и довольно активные, вырастали на этой среде.
Этот метод оказался полезным для первичного исследования почвенных
культур стрептомицетов.
ИНДУЦИРОВАННЫЙ МУТАГЕНЕЗ И СТУПЕНЧАТЫЙ ОТБОР
Методы выделения наиболее активных форм, получающихся в результате
Предыдущая << 1 .. 55 56 57 58 59 60 < 61 > 62 63 64 65 66 67 .. 212 >> Следующая