Книги
чёрным по белому
Главное меню
Главная О нас Добавить материал Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Археология Архитектура Бизнес Биология Ветеринария Военная промышленность География Геология Гороскоп Дизайн Журналы Инженерия Информационные ресурсы Искусство История Компьютерная литература Криптология Кулинария Культура Лингвистика Математика Медицина Менеджмент Металлургия Минералогия Музыка Научная литература Нумизматика Образование Охота Педагогика Политика Промышленные производства Психология Путеводители Религия Рыбалка Садоводство Саморазвитие Семиотика Социология Спорт Столярное дело Строительство Техника Туризм Фантастика Физика Футурология Химия Художественная литература Экология Экономика Электроника Энергетика Этика Юриспруденция
Новые книги
Цуканов Б.И. "Время в психике человека" (Медицина)

Суворов С. "Танк Т-64. Первенец танков 2-го поколения " (Военная промышленность)

Нестеров В.А. "Основы проэктирования ракет класса воздух- воздух и авиационных катапульных установок для них" (Военная промышленность)

Фогль Б. "101 вопрос, который задала бы ваша кошка своему ветеринару если бы умела говорить" (Ветеринария)

Яблоков Н.П. "Криминалистика" (Юриспруденция)
Реклама

Основы учения об антибиотиках - Егоров Н.С.

Егоров Н.С. Основы учения об антибиотиках — М.: Наука, 2004. — 528 c.
ISBN 5-211-04669-2
Скачать (прямая ссылка): osnoviucheniyaobantibiotikah2004.djvu
Предыдущая << 1 .. 65 66 67 68 69 70 < 71 > 72 73 74 75 76 77 .. 212 >> Следующая

Сравнивая эти величины, устанавливают, что испытуемый раствор,
задерживающий развитие тест-организма в 10-й пробирке (разведение 1 :
1024), содержит 320 мкг/мл стрептомицина.
168
Таблица 35
Определение концентрации стрептомицина методом последовательных
разведений
Номер пробирки
Объект исследо- 1 2 3 4 5 6
вания Разведение
1 : 2 1 : 4 1 : 8 1 : 16 1 : 32 1 : 64
Стандарт +
(10 мкг/мл)
Испытуемый
материал
Номер пробирки
Объект исследо- 7 8 9 10 11 12
вания Разведение
1 : 128 1 : 256 1 : 512 1 : 1024 1 : 2048 1 : 4096
Стандарт + + + + + +
(10 мкг/мл)
Испытуемый + +
материал
Примечание. Знак "-" - отсутствие роста тест-микроба, знак "+" - наличие
роста.
Антибиотическую активность испытуемого раствора при работе по методу
последовательных разведений при наличии стандарта можно рассчитать по
следующей формуле:
*=РИ:РС С,
где Ри - максимальная степень разведения испытуемого раствора, при
которой отсутствует рост тест-организма; Рс - максимальная степень
разведения стандартного раствора, обеспечивающая отсутствие роста тест-
микроба; С - исходная концентрация стандартного раствора антибиотика; X -
искомая концентрация антибиотика в исследуемом растворе.
В нашем примере Ри = 1024; Рс = 32; С- 10 мкг/мл; искомая концентрация
антибиотика
X- 1024 : 32 • 10 = 320 мкг/мл.
Метод последовательных разведений дает сопоставимые результаты лишь при
соблюдении таких условий, как:
1) тщательная стерильность проведения анализов;
2) использование постоянных сред для разведения одного и того же
антибиотика;
169
3) внесение определенного количества клеток или спор тест-организма;
4) определенная длительность инкубации пробирок, засеянных тест-
культурой.
Иногда под действием испытуемого антибиотика возникают устойчивые к нему
формы тест-микроба. Появление даже единичных резистентных клеток, которые
могут в дальнейшем развиться, приведет к ошибочным результатам при
определении биологической активности препарата. Чтобы избежать подобного
явления, для разведений используют не бульон, а агаризованные среды,
разлитые в пробирки. После разведения пробирки ставят в наклонном
положении, с тем чтобы получить косячки застывшего агара. На поверхность
скошенного агара микробиологической петлей высевают суспензию тест-
микроба. После этого пробирки помещают в термостат на 24 ч при
температуре, оптимальной для развития тест-организма. Активность
рассчитывают тем же способом, что и при разведении антибиотика
(культуральной жидкости) в жидкой среде. Появление одиночных колоний,
образовавшихся из резистентных форм, в расчет не принимают.
Определять антибиотическую активность методом серийных разведений можно и
на чашках Петри. В пробирки, содержащие по 9 мл расплавленного
питательного агара, вносят по 1 мл изучаемого антибиотика определенного
разведения или культуральной жидкости. После тщательного перемешивания
содержимое пробирки выливают в чашку Петри и дают агару застыть. Затем по
поверхности пластинки штрихами делают посев тест-организ-мов. Чашки
выдерживают в термостате при оптимальной для используемых тест-организмов
температуре в течение 20-21 ч.
Преимущество этого метода по сравнению с пробирочным состоит в том, что в
данном случае каждое разведение изучаемого препарата может быть
использовано для многих тест-организмов.
Диффузионные методы. Количественное определение антибиотиков
диффузионными методами основано на способности антибиотических веществ
диффундировать в агаровых средах и образовывать зоны, в которых не
развиваются используемые тест-организмы. Величина зоны диффузии
антибиотика зависит прежде всего от химической природы антибиотического
вещества и его концентрации, состава агаровой среды, ее pH, температуры и
других факторов, которые необходимо учитывать при анализах.
Антибиотики-полипептиды с большой и сложной молекулой диффундируют
медленнее, чем, например, антибиотики ациклического строения или
антибиотики тетрациклиновой природы и гетероциклического строения.
Поэтому для количественного определения антибиотиков, трудно
диффундирующих в агаризованных
170
средах, необходимо подбирать условия, обеспечивающие лучшую их диффузию.
К таким условиям можно, например, отнести добавление к среде отдельных
веществ, повышающих диффузию антибиотиков. Так, СаС12 способствует
повышению диффузии грамицидина С. Иногда чашки с агаром, тест-культурой и
антибиотиком помещают на 20-24 ч в холодильник (4 °С); тест-организм в
это время не развивается, а антибиотик диффундирует. Используя этот
метод, можно примерно в 2 раза увеличить скорость диффузии антибиотика
при нормальном периоде роста тест-организма.
Концентрации испытуемых антибиотиков не должны быть слишком высокими, так
как установлено, что диаметр зоны задержки роста тест-организма есть
линейная функция логарифмов концентрации антибиотика, но лишь в
определенных пределах концентрации. Так, увеличение концентрации
Предыдущая << 1 .. 65 66 67 68 69 70 < 71 > 72 73 74 75 76 77 .. 212 >> Следующая