Книги
чёрным по белому
Главное меню
Главная О нас Добавить материал Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Археология Архитектура Бизнес Биология Ветеринария Военная промышленность География Геология Гороскоп Дизайн Журналы Инженерия Информационные ресурсы Искусство История Компьютерная литература Криптология Кулинария Культура Лингвистика Математика Медицина Менеджмент Металлургия Минералогия Музыка Научная литература Нумизматика Образование Охота Педагогика Политика Промышленные производства Психология Путеводители Религия Рыбалка Садоводство Саморазвитие Семиотика Социология Спорт Столярное дело Строительство Техника Туризм Фантастика Физика Футурология Химия Художественная литература Экология Экономика Электроника Энергетика Этика Юриспруденция
Новые книги
Цуканов Б.И. "Время в психике человека" (Медицина)

Суворов С. "Танк Т-64. Первенец танков 2-го поколения " (Военная промышленность)

Нестеров В.А. "Основы проэктирования ракет класса воздух- воздух и авиационных катапульных установок для них" (Военная промышленность)

Фогль Б. "101 вопрос, который задала бы ваша кошка своему ветеринару если бы умела говорить" (Ветеринария)

Яблоков Н.П. "Криминалистика" (Юриспруденция)
Реклама

Основы учения об антибиотиках - Егоров Н.С.

Егоров Н.С. Основы учения об антибиотиках — М.: Наука, 2004. — 528 c.
ISBN 5-211-04669-2
Скачать (прямая ссылка): osnoviucheniyaobantibiotikah2004.djvu
Предыдущая << 1 .. 68 69 70 71 72 73 < 74 > 75 76 77 78 79 80 .. 212 >> Следующая

ведущее место в оценке биологической активности антибиотиков. Однако эти
методы имеют ряд недостатков. Так, метод серийных разведений связан с
длительностью анализа, полученные результаты недостаточно точны. Для
методов, связанных с диффузией в агар, также характерны длительность
процесса анализа, зависимость результатов от свойств антибиотика
(растворимость, молекулярная масса и др.), определенная чувствительность
к компонентам агаровой среды, трудность автоматизации. Результаты
турбидиметрических методов нередко зависят от примесей, способных
угнетать или стимулировать рост тест-организма; эти методы неприменимы
для анализа окрашенных или мутных растворов.
Отмеченные недостатки широко применяемых методов стимулировали разработку
других методов учета биологической активности антибиотиков, которые бы
обеспечивали более быстрое получение результатов. В основу разработки
таких методов, обобщенных в обзоре Е.М. Берштейна (1991), были положены
два принципа: связь анализа с механизмом действия антибиотиков и
использование современного оборудования для регистрации результатов
анализа.
Рассмотрим некоторые из этих методов.
Методы, основанные на изменении цитоплазматической мембраны. Одним из
механизмов биологического действия антибиотиков на клетки микроорганизмов
является нарушение проницаемости
176
цитоплазматической мембраны. К числу таких антибиотиков относятся
грамицидин С, нистатин, амфотерицин В, гентамицин. В результате действия
названных антибиотиков микробная клетка теряет жизненно важные компоненты
(ионы калия, магния, АТФ и др.). Обнаружить эти компоненты можно с
помощью физико-химических методов, а их количество в специально
подобранных условиях анализа связано с биологической активностью
антибиотика или его концентрацией.
Для регистрации ионов калия или магния применяют методы плазменной
фотометрии, атомно-абсорбционной спектроскопии, радиометрии,
ионселективных электродов. Содержание АТФ в среде может быть оценено по
изменению люминесценции люциферина.
Методы, основанные на регистрации определенных продуктов метаболизма
тест-организма. Развитие микроорганизмов постоянно сопровождается
выделением в окружающую среду тепла, некоторых продуктов метаболизма,
например диоксида углерода, ряда ферментов и других соединений.
Количество выделяемого тепла, С02 или иных продуктов жизнедеятельности
зависит от фазы роста микроорганизма, интенсивности процесса метаболизма
и других факторов развития популяции.
Определение количества тепла, выделяемого культурой микроорганизма в
единицу времени, С02или каких-либо специфических ферментов может служить
основой количественной оценки антибиотической активности препарата.
1. Определение углекислоты, образующейся при дыхании микроорганизмов.
Может быть осуществлено с помощью С02-чув-ствительного электрода или
радиометрическим методом.
Д.Л. Симпсон и Р.К. Кобос (1982) показали, что подавление образования С02
в суспензии клеток Е. coli пропорционально концентрации тетрациклина в
среде в интервале 33-167 мкг/мл.
2. Учет выделяемого тепла. Известно, что даже небольшие отклонения
метаболизма в культуре микроорганизмов приводят к изменению скорости
выделения тепла, которое регистрируется при достаточной чувствительности
прибора (микрокалориметра).
3. Определение изменения биолюминесценции. Интенсивность
биолюминесценции пропорциональна как содержанию присутствующих в
микробной клетке метаболитов, так и количеству добавленных посторонних
для клетки веществ, активно включающихся во внутриклеточные
ферментативные процессы. В основе одного из этих методов лежит
способность "тусклых" мутантов светящихся бактерий отвечать
светоизлучением на добавление малых количеств (пмоль) миристиновой
кислоты СН3(СН2)]2СООН. С помощью биолюминесценции может быть
177
измерена активность гидролитических ферментов, освобождающих миристиновую
кислоту из сложных липидов.
Анализ такого антибиотика, как церуленин, основан на эффекте
ингибирования этим веществом люминесценции альдегид-зависимых мутантов.
4. Определение антимикробной активности хлортетрацикли-на. Этот метод
основан на изменении скорости ферментативного процесса, а грамицидина С -
на нарушении функции мембраны и выделении фермента люциферазы и
соответственно на изменении интенсивности свечения культуры
люминесцентных бактерий Photobacterium leiugnathi после контакта их с
антибиотиком (Шендеров и др., 1985). Эти же люминесцентные бактерии можно
использовать при определении антибиотической активности тетрациклина,
окситетрациклина и рифамицина.
Рассмотренные методы определения биологической активности антибиотиков
характеризуются оперативностью, чувствительностью, высокой
воспроизводимостью результатов анализа. В то же время высокая стоимость и
дефицит необходимых приборов не позволяют широко применять их.
ХИМИЧЕСКИЕ И ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ
Химические и физико-химические методы определения различных групп
Предыдущая << 1 .. 68 69 70 71 72 73 < 74 > 75 76 77 78 79 80 .. 212 >> Следующая