Книги
чёрным по белому
Главное меню
Главная О нас Добавить материал Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Археология Архитектура Бизнес Биология Ветеринария Военная промышленность География Геология Гороскоп Дизайн Журналы Инженерия Информационные ресурсы Искусство История Компьютерная литература Криптология Кулинария Культура Лингвистика Математика Медицина Менеджмент Металлургия Минералогия Музыка Научная литература Нумизматика Образование Охота Педагогика Политика Промышленные производства Психология Путеводители Религия Рыбалка Садоводство Саморазвитие Семиотика Социология Спорт Столярное дело Строительство Техника Туризм Фантастика Физика Футурология Химия Художественная литература Экология Экономика Электроника Энергетика Этика Юриспруденция
Новые книги
Янин В.Л. "Новгородские акты XII-XV Хронологический комментарий" (История)

Майринк Г. "Белый доминиканец " (Художественная литература)

Хусаинов А. "Голоса вещей. Альманах том 2" (Художественная литература)

Петров Г.И. "Отлучение Льва Толстого " (Художественная литература)

Хусаинов А. "Голоса вещей. Альманах том 1 " (Художественная литература)
Реклама

Микроскопическая техника - Роскин Г.И.

Роскин Г.И., Левинсон Л.Б. Микроскопическая техника — М.: Советская наука, 1957. — 469 c.
Скачать (прямая ссылка): microskopicheskayatehnika1957.djvu
Предыдущая << 1 .. 95 96 97 98 99 100 < 101 > 102 103 104 105 106 107 .. 214 >> Следующая

Рекомендуется реакцию проводить на холоду (в ледяной бане).
Аргинин дает оранжево-красное окрашивание. Через 10 минут срезы вынимаются из смеси и заключаются в глицерин. Окрашивание (т. е. цветная реакция на аргинин) сохраняется в течение нескольких недель и затем постепенно бледнеет.
Метод Серра (1944) является приспособлением биохимического метода Сакагуши к задачам гистохимии.
Бекер (1947) предложил другую модификаций) этого же метода. Фиксируют смесью Буэна, Ценкера или 10-процентным формалином. Заливают в парафин. Для реакции можно использовать срезы, покрытые коллодием (см. стр. 152). Срезы обычным
233
образом доводят до воды, споласкивают в воде и осушают фильтровальной бумагой. Затем помещают на 15 минут в раствор ос-наф-тола и гипохлорида, осушают фильтровальной бумагой, после чего срезы проводят через смесь равных частей хлороформа и пиридина; срезы заключают в смеси пиридина и хлороформа или в в чистом пиридине. Белки, содержащие аргинин, окрашиваются в различные оттенки оранжево-красного цвета. Раствор а-нафто-ла и гипохлорида: к 2 см3 10-процентного NaOH добавляют
2 капли 1-процентного раствора а-нафтола в 70-процентном спирте и 4 капли раствора гипохлорида (1 г NaOCI и 18 г NaCl в 100 см3 дистиллированной воды).
Реакция на триптофан Ваузене — Фюрта в модификации Серра и Кейроз-Лопес (1946). Фиксируют 1—3 часа формалином маленькие кусочки ткани; срезы, изготовленные па замораживающем микротоме, помещают на 3—
5 секунд в водный раствор силиката натрия (плотность 1,1); затем, не промывая, их переводят на 10—15 минут в закрытый флакон со свежеприготовленным реактивом Ваузене (соляная кислота— 10 см3, 2-процентный формалин—1 капля, 0,5-процентпый раствор азотистокислого натрия (NaNOj— 1 капля), и, не промывая, заключают в глицерин; реакция чувствительная, но быстро проходящая.
Реакция натриптофан по методу Кедровско-гоиТрухачевой (1952). Фиксация спиртом, спирт-формолом, заливка в желатину. Желатиновые блоки, если надо, уплотняются в слабом растворе формалина. Возможно тонкие срезы обрабатывают 5 минут 5-процентным раствором альдегида Эрлиха (па-радиметиламинобензальдегид) в 10-процентной серной кислоте (реактив сохраняется 2—3 недели), затем помещают на '/г—1 минуту в концентрированную серную кислоту (до пожелтения срезов) , после чего переносят в дистиллированную воду или в новую порцию реактива. Участки ткани, содержащие гистохимически определимый триптофан — красно-лиловые или фиолетовые. Наступающее при реакции на триптофан окрашивание исчезает в течение, примерно, 5 минут.
Миллонова реакция на тирозин (модификация по Бенсли и Гершу). Приготовление миллонова реактива: к 400 см3 азотной кислоты (уд. вес 1,42), прибавляют 600 см3 дистиллированной воды и оставляют стоять 48 часов. Разбавляют 1 : 9 дистиллированной водой и прибавляют до насыщения кристаллической азотнокислой ртути, фильтруют и добавляют к 400 см3 фильтрата 3 см3 исходной разведенной азотной кислоты и 1,4 г NaN03.
Материал фиксируют формалином или 96-градусньш спиртом, заливают в парафин. Парафин из срезов удаляют бензином; споласкивают безводным ацетоном и дают ему испариться. Срез покрывают миллоновым реактивом и оставляют до появления максимального окрашивания, или же срезы, находящиеся в закрытой бактериологической чашке, помещают в термостат (60°С), где
234
реакция заканчивается в течение 30—60 минут. Споласкивают холодным или подогретым 2-процентным раствором азотной кислоты (2 см3 азотной кислоты, уд. вес 1,42, добавляют к 98 слй дистиллированной воды). Быстро обезвоживают в спиртах, ксилол, бальзам. Протеины, содержащие тирозин, окрашиваются в оранжевый или розово-красный цвет; окраска сохраняется без изменения несколько месяцев.
Реакция на гистидин по Брунсвику. Срезы обрабатывают свежеприготовлеииой диазобензолсерной кислотой. Белки окрашиваются в красный или оранжевый цвет. По мнению некоторых авторов, эта реакция указывает на то, что белок содержит тирозин и гистидин. Если срезы предварительно обрабатывать 33-процентной азотной кислотой, промыть их водой, затем концентрированным раствором соды и, наконец, диазобензосер-ной кислотой, то появление красного окрашивания укажет на присутствие в белке только гистидииа. По-видимому, диазореакция выявляет только феноловые соединения.
Приготовление диазобензолсерной кислоты: 2 г сульфанило-вой кислоты размешивают в 3 см3 дистиллированной воды +2 см3 ледяной уксусной кислоты. К полученной взвеси по каплям прибавляют раствор 1 г азотнстокислого натрия в 2 смг дистиллированной воды. Жидкость фильтруют, осадок промывают водой на фильтре, высушивают и растворяют в концентрированном растворе соды. Годится только свежеприготовленный реактив. Осадок должен быть белым. Пожелтевший осадок или раствор негоден для употребления.
Фиксатор Кретена и Мао (1946) — это реактив Берг-манна и Фокса для осаждения аминокислот, примененный для гистологических целей. К литру 10-процентного раствора хромовокислого калия прибавляют по частям (20—30 г) 300 г кристаллической щавелевой кислоты. Жидкость становится коричневой, затем фиолетовой и щавелевая кислота перестает растворяться. Перед употреблением разводят основной раствор водой в 4—5 раз и добавляют 2—3% «метиленов»; можно добавить также и 5% уксусной или трихлоруксусной кислоты. Этот фиксатор осаждает следующие аминокислоты: гликоколь, аланин, валин, лейцин, ци-стип, цистеин, тирозин, пролин, аспарагин и аргинин. Фиксатор хорошо сохраняет гистологические структуры и почти не сжимает ткани. Особенно хорошо фиксируется костная ткань. Фиксации можно дополнить последующей обработкой хромовой кислотой или двухромовокислым калием.
Предыдущая << 1 .. 95 96 97 98 99 100 < 101 > 102 103 104 105 106 107 .. 214 >> Следующая