Книги
чёрным по белому
Главное меню
Главная О нас Добавить материал Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Археология Архитектура Бизнес Биология Ветеринария Военная промышленность География Геология Гороскоп Дизайн Журналы Инженерия Информационные ресурсы Искусство История Компьютерная литература Криптология Кулинария Культура Лингвистика Математика Медицина Менеджмент Металлургия Минералогия Музыка Научная литература Нумизматика Образование Охота Педагогика Политика Промышленные производства Психология Путеводители Религия Рыбалка Садоводство Саморазвитие Семиотика Социология Спорт Столярное дело Строительство Техника Туризм Фантастика Физика Футурология Химия Художественная литература Экология Экономика Электроника Энергетика Этика Юриспруденция
Новые книги
Янин В.Л. "Новгородские акты XII-XV Хронологический комментарий" (История)

Майринк Г. "Белый доминиканец " (Художественная литература)

Хусаинов А. "Голоса вещей. Альманах том 2" (Художественная литература)

Петров Г.И. "Отлучение Льва Толстого " (Художественная литература)

Хусаинов А. "Голоса вещей. Альманах том 1 " (Художественная литература)
Реклама

Микроскопическая техника - Роскин Г.И.

Роскин Г.И., Левинсон Л.Б. Микроскопическая техника — М.: Советская наука, 1957. — 469 c.
Скачать (прямая ссылка): microskopicheskayatehnika1957.djvu
Предыдущая << 1 .. 96 97 98 99 100 101 < 102 > 103 104 105 106 107 108 .. 214 >> Следующая

«Метиленами» французские авторы называют смесь, которую во Франции прибавляют к спирту при изготовлении спирта-дена-турата. «Метилены» — смесь продуктов перегонки дерева, состоящая из различных альдегидов, фурфурола, кетонов, древесного уксуса. Прибавление 2—3% «мителенов» к различным фиксаторам весьма улучшает результаты фиксации (Ланжерон, 1949),
235
Мочевина
Реакция на мочевину. Реакция основана на том, что мочевина в тканях под воздействием ксантгидроля образует агрегаты игольчатых кристаллов диксантилмочевины.
Небольшие кусочки ткани (реактив плохо проникает) фиксируют 6—12 часов в 6-процентном растворе ксантгидроля в ледяной уксусной кислоте, промывают 48 часов в абсолютном спирте (несколько раз сменить) и через ксилол (не больше часа) заливают в парафин. Ядра окрашивают гематоксилином. Кристаллы имеют светло-желтый или светло-зеленый цвет и хорошо видны. Ксант-гидроль в присутствии воды образует сходные кристаллы, но они хорошо растворяются в спирте. Раствор ксантгидроля нужно всегда приготовлять заново. Нерастворенный ксантгидроль следует хранить в плотно закрытой банке, завернутой в черную бумагу. Локализация кристаллов часто не совпадает с расположением мочевины в живой клетке, поэтому гистохимическое значение реакции невелико.
Нуклеиновые кислоты
Основные гистохимические методы определения нуклеиновых кислот базируются на реакциях трех их основных компонентов: фосфорной кислоты, углеводов и оснований. Для гистохомиче-ского определения пуриновых и пиримидиновых оснований служит микроспектрография в ультрафиолетовых лучах (см. стр. 55), так как эти вещества избирательно абсорбируют ультрафиолетовые лучи с длиной волн 260 mi. Реакции нуклеиновых кислот с рядом основных красителей (метиловым зеленым, пиронином, малахитовым зеленым, тионином и т. д.) основаны, как полагают многие исследователи, на способности этих красителей давать солеобразные соединения с отрицательно заряженной группой нуклеиновых кислот, а именно с фосфорной кислотой. Примером использования таких реакций является окраска метиловым зеленым и пиронином (см. метод Браше, стр. 240). Реакция иа углеводы для определения нуклеиновых кислот пспользованы в методах Фельгена, а также Турчини. Представляют интерес новейшие исследования с применением инфракрасных лучей: дезоксирибонуклеиновая и рибонуклеиновая кислоты дают интенсивные полосы поглощения в зоне 8,1 ц, 9,35 » и 10,3 м., причем дезоксирибонуклеиновая отличается от рибонуклеиновой кислоты резко выраженной полосой поглощения в зоне 9,8 и: Исследователи полагают, что абсорбция нуклеиновыми кислотами инфракрасных лучей определяется, повидимому, присутствием сахаров (рибозы и дезоксири-бозы), а также фосфорной кислоты.
Реакция Фельгена является методом выявления в клетках дезоксирибонуклеиновой (тимопуклеиновой) кислоты. Реакция Фельгена состоит из двух процессов: гидролиза и окрашивания с реактивом Шиффа. Исследования Стесей и его сотрудников
236
(1946, 1949) показали, что дезоксирибоза, входящая в состав ти-монуклеиновон кислоты, при гидролизе превращается в альдегид, дающий красное окрашивание с реактивом Шиффа (фуксин-сер-нистая кислота), который является весьма чувствительным реактивом на альдегиды. Тонкость и специфичность реакции Фельгеиа на дезоксирибонуклеиновую кислоту подтверждена многочисленными исследователями.
Это, однако, не означает, что метод Фельгена автоматически может быть применен для выявления тимонуклеиновой (дезоксирибонуклеиновой) кислоты в любых цитологических условиях. К нему применимо общее для любого экспериментального метода положение: необходимо учитывать наиболее благоприятные условия осуществления данной реакции. Для реакции Фельгена наиболее существенное значение имеют два обстоятельства. Во-первых,— это способ фиксации. Так, например, исчезновение реакции Фельгена в процессе созревания ядра яйцеклеток (например, на стадии «перистых» хромосом) является артефактом, зависящим от применения неподходящего для данного объекта фиксатора — сулемы с уксусной кислотой, — вызывающего набухание хромосом и их растворение в результате гидролиза. Во-вторых, — это концентрация дезоксирибонуклеиновой кислоты. Реакция Фельгена может быть отрицательной в условиях большой дисперсности и относительно малых количеств дезоксирибонуклеиновой кислоты. Так, например, на определенных стадиях развития яйцеклеток лягушки реакция Фельгена становится отрицательной, однако при энергичном центрифугировании на центрифужном поле ядра собирается один или несколько комочков, дающих положительную реакцию Фельгена. Природа протеинов, с которыми связана дезоксирибонуклеиновая кислота в разных клетках и у различных видов животных, также может оказывать значительное влияние на течение реакции Фельгена.
В последнее время некоторые авторы критиковали утверждение о специфичности и строгой локализации реакции Фельгена; одни утверждали, что при проведении реакции образуется основной растворимый краситель, который вторично окрашивает базо-фильный белок «хромосомин», другие предполагали, что окраска, например, хромосом, определяется не химической реакцией, а адсорбцией красителя на поверхности структур. Экспериментальная проверка этих утверждений показала их несостоятельность. Важно, что различные методы — гистоспектрография в ультрафиолетовых лучах, окрашивание определенными красителями, реакции Фельгена, Браше и Турчнни дают совпадающие результаты по нахождению и распределению нуклеиновых кислот в клетках и тканях. Кроме того, доказано, что реакция Фельгена не получается после обработки препарата ферментом тимонуклеодеполимеразой. Очень убедителен опыт, в котором биохимически очищенный препарат тимонуклеиновой кислоты обрабатывали фиксатором Цен-кера, а полученный при этом преципитат заливали в агар и изго-
Предыдущая << 1 .. 96 97 98 99 100 101 < 102 > 103 104 105 106 107 108 .. 214 >> Следующая