Книги
чёрным по белому
Главное меню
Главная О нас Добавить материал Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Археология Архитектура Бизнес Биология Ветеринария Военная промышленность География Геология Гороскоп Дизайн Журналы Инженерия Информационные ресурсы Искусство История Компьютерная литература Криптология Кулинария Культура Лингвистика Математика Медицина Менеджмент Металлургия Минералогия Музыка Научная литература Нумизматика Образование Охота Педагогика Политика Промышленные производства Психология Путеводители Религия Рыбалка Садоводство Саморазвитие Семиотика Социология Спорт Столярное дело Строительство Техника Туризм Фантастика Физика Футурология Химия Художественная литература Экология Экономика Электроника Энергетика Этика Юриспруденция
Новые книги
Янин В.Л. "Новгородские акты XII-XV Хронологический комментарий" (История)

Майринк Г. "Белый доминиканец " (Художественная литература)

Хусаинов А. "Голоса вещей. Альманах том 2" (Художественная литература)

Петров Г.И. "Отлучение Льва Толстого " (Художественная литература)

Хусаинов А. "Голоса вещей. Альманах том 1 " (Художественная литература)
Реклама

Микроскопическая техника - Роскин Г.И.

Роскин Г.И., Левинсон Л.Б. Микроскопическая техника — М.: Советская наука, 1957. — 469 c.
Скачать (прямая ссылка): microskopicheskayatehnika1957.djvu
Предыдущая << 1 .. 97 98 99 100 101 102 < 103 > 104 105 106 107 108 109 .. 214 >> Следующая

237
товляли срезы: положительную реакцию Фельгена давали только те участки, где находился преципитат.
Фиксировать материал для реакции Фельгена можно рядом цитологических фиксаторов (жидкости Шампи, Флемминга без уксусной кислоты, Ценкера, Буэна — Аллена, Гелли). Реакцию можно проводить на мазках, срезах и кусочках.
Срезы, вынутые из дистиллированной воды, споласкивают холодной 1/N соляной кислотой, а затем подвергают гидролизу при 60° в 1/N соляной кислоте (82,5 см* соляной кислоты с удельным весом 1,19 на 1 л дистиллированной воды) в течение 4 — 15 минут, иногда до 25 минут. Время гидролиза зависит от исследуемого материала и примененной фиксации и определяется опытным путем. В большинстве случаев оно составляет 4—6 минут. У низших беспозвоночных обычно больше: 8—12 минут.
Необходимая длительность гидролиза при разных фиксаторах:
Смесь Буэна-Дюбоска 6 минут Смесь Гелли 8 минут
» Буэна-Аллена 22 » » Петрункевича 3 »
» Карнуа 6 » » Ценкера 5 »
х Шампи 25 » » Ценкера с добавле-
» Флемминга 16 » » нием формалина 5 »
Гидролиз следует производить в стеклянном стакане на водяной бане при постоянно контролируемой температуре нли в термостате. Высоту уровня жидкости отмечают на стенке стакана восковым карандашом, по мере испарения добавляют дистиллированную воду.
Препарат споласкивают в дистиллированной воде, помещают в фуксин-сернистую кислоту на 1—2 часа, три раза промывают водой, содержащей S02 (для того, чтобы удалить из него остатки реактива Шиффа и свободного фуксина). В каждом сосуде с сер-'иистой водой держат препарат по 2 минуты. Промывают в проточной воде 5—10 минут, обезвоживают, проводят через ксилол и заключают в канадский бальзам. Дезоксирибонуклеиновая кислота окрашивается в красно-фиолетовый цвет. Плазму можно докрасить светлым зеленым.
Приготовление ф у к с и н-с е р н и с т о й кислоты (реактив Шиффа): 1 г основного фуксина тщательно растереть в фарфоровой ступке и растворить в 200 см? кипящей воды; остудить до 50° и прибавить 20 см? 1/N соляной кислоты; остудить до 25° и прибавить 1 г сухого бисульфита натрия (NaHS03). Налить в склянку с хорошо притертой пробкой, плотно закрыть и хранить в темноте. Через несколько часов жидкость начнет обесцвечиваться, а через 24 часа она годна к употреблению. Жидкость должна быть бесцветной или иметь слабо желтый цвет. Когда она окрашивается в розовый или красный цвет, употреблять ее больше нельзя. Приготовление сернистой воды: к 200 см? дистиллированной воды нужно прибавить 10 см? 10-процептпого
238
раствора бисульфита натрия и 10 см3 1/N соляной кислоты. Готовить каждый раз перед употреблением.
При проведении реакции каждый раз обязательно следует ставить контроль: часть препаратов без предварительного гидролиза на 10—15 минут помещают в фуксян-сернистую кислоту. При этом ие должно получаться красно-фиолетового окрашивания.
Многие исследователи советуют готовить реактив Шиффа по прописи Томази: растворяют 1 г основного фуксина в ?00 смз кипящей дистиллированной воды. Взбалтывают в течение 5 минут и затем охлаждают точно до 50°. Фильтруют, после чего добавляют к фильтрату' 20 см3 1/N НС1. Охлаждают до 25° и добавляют 1 г метабисульфита натрия (или калия) (Na2S205). Раствор оставляют в темноте па 14—24 часа. Затем добавляют 2 г активированного угля и взбалтывают 1 минуту. Фильтруют. Раствор хранят в темноте при температуре 0—4°. Перед гидролизом полезно 24 часа выдержать в 96-градусном спирте для удаления липидов.
Метод выявления в клетках и тканях рибонуклеиновой кислоты. Основным моментом этого метода, разработанного Браше, является сравнение двух препаратов (срезы или мазки), один из которых предварительно обрабатывается ферментом рибонуклеазой, растворяющим рибонуклеиновую кислоту и не затрагивающим тимонукленновую кислоту. Ри-бонуклеазу можно получить (Роскин и Гинзбург 1944; Роскин и Харлова, 1944) следующим образом. Свежую бычью поджелудочную железу оставляют на воздухе в течение 5—6 часов, затем, к тщательно размельченной железе добавляют полтора объема 0,1 N уксусной кислоты и помещают па 24 часа в термостат при температуре 37°, после этого смесь кипятят 10 минут и фильтруют через бумажный фильтр. Фильтрат нейтрализуют двууглекислым натрием и снова фильтруют. Жидкую часть днализируют в коллодий-ных или целлофановых мешочках l'/г—2 суток. Затем центрифугируют. Прозрачная жидкость содержит рибонуклеазу. Срезы или мазки (предварительно зафиксированные смесью Гелли) помещают на 90 минут в раствор рибоиуклеазы при температуре 60—65°. Одновременно контрольные препараты на то же время и при той же температуре помещают в дистиллированную воду.
Препараты, обработанные рибонуклеазой и дистиллированной водой, окрашивают метиловым зеленым и пиронином.
По-видимому, пироняи окрашивает специфически клеточные элементы, содержащие рибонуклеиновую кислоту, исчезающую после предварительной обработки рибонуклеазой и остающуюся на препаратах, обработанных только горячей дистиллированной водой.
Предыдущая << 1 .. 97 98 99 100 101 102 < 103 > 104 105 106 107 108 109 .. 214 >> Следующая