Книги
чёрным по белому
Главное меню
Главная О нас Добавить материал Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Археология Архитектура Бизнес Биология Ветеринария Военная промышленность География Геология Гороскоп Дизайн Журналы Инженерия Информационные ресурсы Искусство История Компьютерная литература Криптология Кулинария Культура Лингвистика Математика Медицина Менеджмент Металлургия Минералогия Музыка Научная литература Нумизматика Образование Охота Педагогика Политика Промышленные производства Психология Путеводители Религия Рыбалка Садоводство Саморазвитие Семиотика Социология Спорт Столярное дело Строительство Техника Туризм Фантастика Физика Футурология Химия Художественная литература Экология Экономика Электроника Энергетика Этика Юриспруденция
Новые книги
Янин В.Л. "Новгородские акты XII-XV Хронологический комментарий" (История)

Майринк Г. "Белый доминиканец " (Художественная литература)

Хусаинов А. "Голоса вещей. Альманах том 2" (Художественная литература)

Петров Г.И. "Отлучение Льва Толстого " (Художественная литература)

Хусаинов А. "Голоса вещей. Альманах том 1 " (Художественная литература)
Реклама

Микроскопическая техника - Роскин Г.И.

Роскин Г.И., Левинсон Л.Б. Микроскопическая техника — М.: Советская наука, 1957. — 469 c.
Скачать (прямая ссылка): microskopicheskayatehnika1957.djvu
Предыдущая << 1 .. 101 102 103 104 105 106 < 107 > 108 109 110 111 112 113 .. 214 >> Следующая

Гиалуроновая кислота
Для выявления кислых полисахаридов типа гиалуроновой кислоты Хэл (1946) применил фиксацию в обезвоживающей среде (чтобы избежать мх растворения в воде). Реакция основана на соединении кислых полисахаридов с железом и выявлении железа посредством реакции с турнбулевой синью.
245
Железо не соединяется с нейтральными полисахаридами или протеинами. Для различия между гиалуроновой кислотой и другими веществами, которые могут давать голубую окраску, Хэл предлагает обрабатывать один из срезов гиалуронидазой и сравнивать с другими срезами.
Метод Хэла для кислых полисахаридов.
1. Фиксируют кусочки ткани толщиной в 3—4 мм жидкостью Кар-нуа в течение 0,5 часа. 2. Обрабатывают их абсолютным спиртом, просветляют и заделывают в парафин. 3. Приготовляют срезы и помещают их на предметные стекла. 4. На депарафинированные срезы наливают раствор уксуснокислого железа и через 10 минут хорошо промывают их дистиллированной водой. Для приготовления раствора уксуснокислого железа смешивают равные объемы диализированной гидроокиси железа (концентрация не указана) и 2 М раствора уксусной кислоты. 5. Обрабатывают срезы 10 минут 0,02 М раствором железосинеродистого калия в 0,14 М растворе соляной кислоты, промывают водой и, по желанию, докрашивают (например, фуксином). 6, Быстро обезвоживают, просветляют ксилолом и заключают в канадский бальзам.
Кислый полисахарид дает синее окрашивание.
Мукопротеины
Толуидиновый синий окрашивает многие и разнообразные кислые вещества, но метахроматическое окрашивание этим красителем мукоидных соединений, содержащих полисахаридные эфиры серной кислоты, — специфично для этих соединений (если строго соблюдается метод Лизона, 1935). «Мнимое» метахроматичное окрашивание может быть устранено быстрой обработкой спиртом, который обеспечивает «настоящую реакцию» с красной окраской, характерной и специфичной для полисахаридных эфиров серной кислоты.
Раствор основного ацетата свинца является лучшим фиксатором для тканей, подвергаемых метахроматичному окрашиванию толуидиновым синим.
Можно применить смесь этого фиксатора с формалином для сокращения срока фиксации.
Метод Лизона для выявления полисахаридных эфиров серной к и с л о ты. Объект 12—24 часа фиксируют в смеси равных объемов 8-процентного раствора основного ацетата свинца и 14—16-(процентного формалина. Приготовляют парафиновые срезы. Окрашивают толуидиновым синим 30 минут, используя для одних срезов раствор А, для других раствор Б; быстро и хорошо промывают в спирте, заключают в натуральное кедровое масло.
Приготовление растворов красителя: раствор А: 0,1-процентный раствор толуидинового синего в 1-градусном спирте; раствор Б : 0,1-процентный раствор толуидинового синего в 30-градусном спирте. Растворы выдерживают несколько дней для созревания.
246
Гликоген
Все попытки выработать гистохимические методы для определения в клетках моносахаридов, в частности глюкозы, остались безрезультатными. Глюкоза чрезвычайно легко растворима в воде, ее трудно осадить, и поэтому до сих пор не удалось сохранить и стабилизировать ее при фиксации и дальнейшей обработке материала.
Другой углевод, часто встречающийся в животных клетках, — полисахарид гликоген, удается выявить сравнительно легко.
Обычно гликоген фиксировали абсолютным спиртом, потому что, с одной стороны, он не растворяется в спирте и осаждается им, а с другой — легко растворяется в воде. Но спирт в концентрации ниже 70° почти не подавляет гидролизирующих ферментов. Он медленно проникает в ткань (1 мм в час). Вследствие этого, как указывает Шабадаш (1947), создание тормозной 70-гра-дусной концентрации спирта даже в поверхностном миллиметровом слое произойдет только через 120—150 минут (ткани богаты водой). К этому времени тканевый гликогенолиз зайдет настолько далеко, что спирт сможет осадить только часть предсуществовав-шего гликогена. Следует считаться с тем, что вырезание кусочка резко усиливает внутритканевый распад гликогена. Кроме того с гистологической точки зрения спирт плохо фиксирует ткани (плохо проникает, сжимает ткани, делает кусочки слишком твердыми и т. д.). Другой общеупотребительный фиксатор—жидкость Кар-нуа (абсолютного спирта 5 см3, хлороформа 3 см3, ледяной уксусной кислоты 1 см3) тоже фиксирует не достаточно хорошо.
Абсолютный спирт и жидкость Карнуа не сохраняют всего гликогена в тканях.
Лизан (1953) считает, что первый фиксатор, предложенный Карнуа (абсолютного спирта 30 см3, ледяной уксусной кислоты 10 см3), меньше сжимает кусочки ткани и в ряде случаев дает хороший результат. Фиксировать жидкостями Карнуа не больше 1—2 часов.
Гликоген, как коллоид, набухает в воде и неспособен диффундировать сквозь неповрежденную оболочку клеток. Поэтому возможно применять и водные фиксаторы. Хорошие результаты дает фиксатор Буэна или лучше Буэна — Аллена (насыщенного водного раствора пикриновой кислоты 75 см3, химически чистого формалина 25 см%, ледяной уксусной кислоты 5 смъ. Жидкость нагревают в закупоренном сосуде до температуры 38°, а затем прибавляют 1,5 г кристаллической хромовой кислоты и растворяют 2 г мочевины. Фиксатор готовят перед употреблением).
Предыдущая << 1 .. 101 102 103 104 105 106 < 107 > 108 109 110 111 112 113 .. 214 >> Следующая