Книги
чёрным по белому
Главное меню
Главная О нас Добавить материал Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Археология Архитектура Бизнес Биология Ветеринария Военная промышленность География Геология Гороскоп Дизайн Журналы Инженерия Информационные ресурсы Искусство История Компьютерная литература Криптология Кулинария Культура Лингвистика Математика Медицина Менеджмент Металлургия Минералогия Музыка Научная литература Нумизматика Образование Охота Педагогика Политика Промышленные производства Психология Путеводители Религия Рыбалка Садоводство Саморазвитие Семиотика Социология Спорт Столярное дело Строительство Техника Туризм Фантастика Физика Футурология Химия Художественная литература Экология Экономика Электроника Энергетика Этика Юриспруденция
Новые книги
Янин В.Л. "Новгородские акты XII-XV Хронологический комментарий" (История)

Майринк Г. "Белый доминиканец " (Художественная литература)

Хусаинов А. "Голоса вещей. Альманах том 2" (Художественная литература)

Петров Г.И. "Отлучение Льва Толстого " (Художественная литература)

Хусаинов А. "Голоса вещей. Альманах том 1 " (Художественная литература)
Реклама

Микроскопическая техника - Роскин Г.И.

Роскин Г.И., Левинсон Л.Б. Микроскопическая техника — М.: Советская наука, 1957. — 469 c.
Скачать (прямая ссылка): microskopicheskayatehnika1957.djvu
Предыдущая << 1 .. 102 103 104 105 106 107 < 108 > 109 110 111 112 113 114 .. 214 >> Следующая

Фиксируют от 1 до 6 часов при температуре 37°.
Лизон (1953) рекомендует фиксировать жидкостью Жандра: насыщенного раствора пикриновой кислоты в 90-градусном спирте (приблизительно 7-процентная пикриновая кислота) 80 см3; формалина 15 см3, ледяной уксусной кислоты 5 см3. По мнению
Лизона, наилучшие результаты получаются, если фиксировать от 1 до 4 часов при температуре от 0 до —Г.
Основываясь на том, что пикриновая кислота in vitro ие осаждает гликогена, некоторые авторы считают, что в процессе фиксации гликогена пикриновой кислотой происходит не обычное осаждение гликогена, а иммобилизация его на белковом или каком-то другом субстрате.
В последнее время А. Л. Шабадаш предложил ряд фиксаторов для гликогена.
Он считает, что фиксатор должен тормозить гликогенолиз, обеспечить нерастворимость гликогена и хорошо фиксировать ткань. Для отравления ферментов Шабадаш применяет соли пикриновой или фосфорновольфрамовой кислот, соли тяжелых металлов, формальдегид (для амилаз) и флоридзин, ионы меди, цинка, кальция и слабо кислую реакцию раствора (для фосфоглюкомутазы, чем достигается торможение фосфоролиза). В целях стабилизации гликогена А. Л. Шабадаш вводит в свои фиксаторы мало воды.
Смеси А. Л. Шабадаша были проведены в нашей лаборатории. Наилучшие результаты дал нейтральный фиксатор, который мы и рекомендуем. Состав: спирт 96-градусный — 100 см3, азотнокислая медь— 1,8 г, азотнокислый кальций — 0,9 ?, формалин— 10 см3.
Фиксировать объекты 3 часа, перенести в раствор: спирта 90-градусного—100 см3, азотнокислого кальция — 2,6 г, формалина — 10 см3 — на 3 часа, промыть в нескольких сменах чистого спирта — 6—12 часов. Залить в целлоидин или парафин.
Для убыстрения фиксации Шабадаш рекомендует инъициро-вать фиксирующие смеси в кровеносное русло, предварительно промытое 1—12-процентным раствором азотнокислого натрия, на 100 см3 которого прибавляется 0,45 г флоридзина.
При выборе фиксатора надо иметь в виду, что гликоген в разных тканях и у разных животных имеет свои особенности и поэтому ни один фиксатор не дает во всех случаях одинаково хороших результатов. Необходимо, изучая определенный материал, предварительно испробовать несколько фиксаторов.
Парафиновые срезы следует расправлять не иа воде, а на 50-градусном или 70-градусном спирте.
Для выявления гликогена применяют несколько методов. Самый старый из них — это окраска гликогена иодом.
Йодная реакция Клода Бернара. Метод основан на том, что гликоген под действием иода окрашивается в красно-бурый или коричневый цвет.
Амилоид и некоторые протеидные гранулы также окрашиваются иодом в коричневый цвет. Поэтому йодную реакцию нужно всегда контролировать при помощи птиалина. Для этого срезы обрабатывают профильтрованной слюной в течение 30 микут при температуре 37°, — гликоген должен перейти в сахар, раствориться и йодная реакция даст отрицательный результат. Амилоид, хитин
248
и другие вещества не растворяются птиалином и остаются окрашенными.
Йодная реакция, контролируемая обработкой слюной, наиболее надежная из всех методов выявления гликогена. Ею всегда следует пользоваться для контроля других методов.
Однако этот метод имеет ряд недостатков: 1) Он не слишком чувствителен: при содержании гликогена меньше 0,3—0,5 мг отчетливого окрашивания не получается. 2) Не допускает применения иммерсионных объективов, потому что при больших увеличениях окраска становится расплывчатой. 3) Препараты недолговечны, так как окраска быстро выцветает, кроме того, часть гликогена со временем растворяется и вымывается из срезов.
Йодной реакцией можно пользоваться и на свежем материале и на срезах. Обрабатывать их нужно раствором Люголя (иода 1 г, иодистого калия 2 г, дистиллированной воды 300 cmz) и рассматривать в глицерине.
Лизон рекомендует метод Дрейсенса в своей модификации для того, чтобы сделать окраску более постоянной.
Метод Дрейсенса. Фиксировать в смесях Карнуа или Жандра; заключать в парафии или целлоидин; на срезах окрасить ядра квасцовым карминам; 96-градусный спирт; 100-градусный спирт; поместить в смесь, составленную из равных частей раствора Люголя и карбол-ксилола на 3—5 минут (энергично взболтать, собрать жидкость над водой); промыть в карбол-ксилоле; ксилол; канадский бальзам.
Раньше гликоген обычно окрашивали кармином по Бесту.
К армии по Б есту. Механизм реакции не ясен; один авторы считают, что происходит растворение кармииа в гликогене (подобно растворению судана III в жире), другие — что прн окрашивании происходит какая-то химическая реакция.
Наконец, возможно, что окраска обусловливается адсорбцией. Кармином, по Бесту, кроме гликогена окрашиваются некоторые клеточные гранулы, слизь, кутикуляриые каемки эпителия и т. д.. так что метод не слишком специфичен и не может считаться настоящим гистохимическим методом. Поэтому всегда следует ставить контроль с птиалином слюны.
Ткань фиксировать любым фиксатором, применяемым для выявления гликогена, заливать в целлоидин или парафии, срезы расправлять ие на воде, а на 50-градусном спирте, освободить срезы от парафина и довести по нисходящим спиртам до воды, окрасить ядра каким-либо гематоксилином, в случае необходимости дифференцировать спиртом, подкисленным соляной кислотой, тщательно промыть, красить кармином по Бесту (см. ниже) 5 минут* дифференцировать (ие мыть перед этим водой) в следующей смесн: абсолютного спирта — 30 см3, дистиллированной воды 100 cmz. Дифференцировать обычно нужно 3—5 минут, пока от препарата ие перестанут отходить облачка краски, промыть 80-градусиым спиртом, обезводить, провести через ксилол, заключить в канадский бальзам.
Предыдущая << 1 .. 102 103 104 105 106 107 < 108 > 109 110 111 112 113 114 .. 214 >> Следующая