Книги
чёрным по белому
Главное меню
Главная О нас Добавить материал Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Археология Архитектура Бизнес Биология Ветеринария Военная промышленность География Геология Гороскоп Дизайн Журналы Инженерия Информационные ресурсы Искусство История Компьютерная литература Криптология Кулинария Культура Лингвистика Математика Медицина Менеджмент Металлургия Минералогия Музыка Научная литература Нумизматика Образование Охота Педагогика Политика Промышленные производства Психология Путеводители Религия Рыбалка Садоводство Саморазвитие Семиотика Социология Спорт Столярное дело Строительство Техника Туризм Фантастика Физика Футурология Химия Художественная литература Экология Экономика Электроника Энергетика Этика Юриспруденция
Новые книги
Янин В.Л. "Новгородские акты XII-XV Хронологический комментарий" (История)

Майринк Г. "Белый доминиканец " (Художественная литература)

Хусаинов А. "Голоса вещей. Альманах том 2" (Художественная литература)

Петров Г.И. "Отлучение Льва Толстого " (Художественная литература)

Хусаинов А. "Голоса вещей. Альманах том 1 " (Художественная литература)
Реклама

Микроскопическая техника - Роскин Г.И.

Роскин Г.И., Левинсон Л.Б. Микроскопическая техника — М.: Советская наука, 1957. — 469 c.
Скачать (прямая ссылка): microskopicheskayatehnika1957.djvu
Предыдущая << 1 .. 103 104 105 106 107 108 < 109 > 110 111 112 113 114 115 .. 214 >> Следующая

В результате гликоген окрашивается в ярко-красный цвет, ядра клеток окрашены гематоксилином.
Кармин по Бесту приготовляется следующим образом: кармииа 2 г, углекислого калия 1 г, хлористого калия 1 г, растереть в ступке, растворить, в 60 сж3 дистиллированной воды, осторожно прокипятить, охладить и добавить. 20 сж3 нашатырного спирта. Краситель следует сохранять в темной скляике с притертой пробкой; он годен к употреблению 1—2 месяца. Перед употреб-
249
лением разводят основной раствор: кармина 2 части, нашатырного спирта 2 части, метилового спирта 3 части. Следует иметь в виду, что отрицательный результат после окраски кармином по Бесту не показывает, что в исследуемом материале нет гликогена, потому что иногда приготовленный раствор не окра шивает препараты вследствие загрязнения реактивов. Отрицательный результат следует всегда проверять, окрашивая препараты при помощи йодной реакции или по методу Бауэра,
Реакция Бауэра. Метод основан на том, что разведенная хромовая кислота окисляет спиртовые группы гликогена, в результате чего образуются альдегиды. Последние с фуксин-серни-стой кислотой (стр. '239) дают красно-фиолетовое окрашивание.
Реакция Бауэра соединяет специфичность йодной реакции с четкостью и ясностью морфологических картин, получаемых после окраски кармином по Бесту.
По методу Бауэра кроме гликогена окрашиваются и другие сложные полисахариды: целлюлоза (дает обычно не красно-фиолетовое, а красное окрашивание), туницин, галактоген и т. д. (но не инулин). В животном организме эти вещества очень редко встречаются совместно, так что практически реакция Бауэра достаточно специфична для обнаружения гликогена в животных тканях.
Окраску, проведенную по этому методу, следует всегда контролировать при помощи птиалина (после обработки слюной реакция должна быть отрицательной), она также не должна получаться на препаратах, подвергнутых воздействию фуксин-сернистой кислоты, но не хромированных. Поскольку фуксин-сернистая кислота сама по себе способна при длительном воздействии гидролизировать тимонуклеиновую кислоту, ею нельзя обрабатывать препарат больше 10—'15 минут. В противном случае может получиться реакция Фельгена.
Обработка хромовой кислотой (или перйодатом, см. ниже) может вызвать частичное растворение гликогена. Поэтому после освобождения срезов от целлоидина или парафина их необходимо покрыть тонкой целлоидиновой пленкой, которая делает гликогеи нерастворимым в воде. Реакция проводится следующим образом: материал фиксируют соответствующим фиксатором (см. выше); заливают в парафин; депарафинированные срезы после абсолютного спирта помещают в 1-процентный раствор целлоидина в смеси равных частей эфира и абсолютного спирта на 2 минуты; вынимают предметное стекло и дают стечь целлоидину в течение 1 минуты; вытирают нижнюю сторону стекла, уплотняют целлоидин в 70-градусном спирте 3 минуты, затем промывают водой; помещают срезы в 4-процентную хромовую кислоту на 1 час нли 1-процентную на ночь (большая концентрация хромовой кислоты или большее время воздействия ослабляют реакцию), промьгваю проточной водой 5 минут; помещают в реактив Шиффа (фуксин-сер-нистую кислоту) на 15—45 минут; промывают 3 раза сернистой водой (см. стр. 239) по 3 минуты; промывают проточной водой 5 минут; окрашивают ядра любым контрастным ядерным красите-250
лем; спирт 70-градусный; спирт 90-градусный, растворяют целлои- 1 дин в спирт-эфире (1:1) 3 минуты; абсолютный спирт; ксилол; канадский бальзам.
В результате гликоген окрашивается в красно-фиолетовый цвет.
Л. Л. Шабадаш предложил новый метод выявления гликогена, химически обоснованный и весьма чувствительный (рис. 84). Метод основан на том, что перйодат калия (KJO4) или натрия (NaJ04 ¦ ЗН20) при воздействии на полисахариды избирательно окисляет спиртовые группы второго и третьего углеродных атомов гексозной частицы, превращая их в альдегидные. Свободные альдегидные группы затем реагируют с фуксин-сернистой кислотой, давая фиолетово-вишневое окрашивание.
1) Депарафинированные и отмытые дистиллированной водой срезы поместить на 20—25 минут в 0,01 М раствор перйодата калия или натрия. Раствор готовится всегда непосредственно перед употреблением на бидистиллированиой воде и употребляется только один раз; его следует защищать от яркого дневного света. 2) Сполоснуть срезы в трех сменах дистиллированной воды по
3 минуты. 3) Поместить на 20—25 минут в фуксин-сернистую кислоту. 4) Промыть 3 раза сернистой водой (см. стр. 239). 5) Промыть дистиллированной водой. 6) Докрасить любым контрастным красителем (светлым зеленым, метиленовым синим и т. п.), заключить в канадский бальзам.
В результате гликоген окрашивается в интенсивный фиолетово-вишневый цвет. Кроме гликогена окрашиваются глюкозные компоненты глюкопротеидных и мукоидных образований и белков типа коллагена (содержится лактоза) и овальбумина (содержится глюкозамин). Все эти вещества различаются по цвету. Полисахариды окрашиваются интенсивнее всего, мукоиды — слабее, глюко-цротеиды — совсем слабо.
Предыдущая << 1 .. 103 104 105 106 107 108 < 109 > 110 111 112 113 114 115 .. 214 >> Следующая