Книги
чёрным по белому
Главное меню
Главная О нас Добавить материал Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Археология Архитектура Бизнес Биология Ветеринария Военная промышленность География Геология Гороскоп Дизайн Журналы Инженерия Информационные ресурсы Искусство История Компьютерная литература Криптология Кулинария Культура Лингвистика Математика Медицина Менеджмент Металлургия Минералогия Музыка Научная литература Нумизматика Образование Охота Педагогика Политика Промышленные производства Психология Путеводители Религия Рыбалка Садоводство Саморазвитие Семиотика Социология Спорт Столярное дело Строительство Техника Туризм Фантастика Физика Футурология Химия Художественная литература Экология Экономика Электроника Энергетика Этика Юриспруденция
Новые книги
Янин В.Л. "Новгородские акты XII-XV Хронологический комментарий" (История)

Майринк Г. "Белый доминиканец " (Художественная литература)

Хусаинов А. "Голоса вещей. Альманах том 2" (Художественная литература)

Петров Г.И. "Отлучение Льва Толстого " (Художественная литература)

Хусаинов А. "Голоса вещей. Альманах том 1 " (Художественная литература)
Реклама

Микроскопическая техника - Роскин Г.И.

Роскин Г.И., Левинсон Л.Б. Микроскопическая техника — М.: Советская наука, 1957. — 469 c.
Скачать (прямая ссылка): microskopicheskayatehnika1957.djvu
Предыдущая << 1 .. 108 109 110 111 112 113 < 114 > 115 116 117 118 119 120 .. 214 >> Следующая

Ацетальфосфатиды окрашиваются в темно-фиолетовый цвет. Если окрашивание красноватое или красное, то к результатам следует отнестись с осторожностью и провести указанные выше контрольные исследования. Паниель (1951) считает, что метод выявляет только свободные, но не связанные с протеинами ацетальфосфатиды.
Адреналин и соединения, имеющие феноловые группы. Кужар (1943) рекомендует фиксировать 24—48 часов в смеси: 10-процентный нейтральный формалин — 3 части, насыщенный водный раствор иодноватокислого калия (KJ03) —
1 часть. Срезы после парафиновой заливки окрашивают железным гематоксилином по Рего. Метод основан на том, что при действии альдегидов на фенолы образуются полимерные соединения типа пластмассы «бакелита». Эта реакция наступает, если фиксируют ткани, содержащие соединения фенола (медуллярный слой надпочечника, адреналинэргические нервы симпатической нервной системы). Интенсивность полимеризации зависит от длительности фиксации, причем окислителя (бихроматы, иодаты и др.) ускоряют
260
этот процесс. Образовавшиеся в результате действия реактива бакелиты способны интенсивно окрашиваться железным гематоксилином. Кужар предложил для фиксации и другую смесь: 2-про-центная осмиевая кислота — 1 часть, 3-процентный раствор йодистого калия (KJ) — 3—5 частей. Эта смесь восстанавливает феноловые соединения, в частности адреналин и адреналиноподобные вещества. Продолжительность фиксации — 24—48 часов.
Гистамин. Реакция Кужара (1947) основана на способности гистамина восстанавливать нитрат ртути. Таким образом можно получить элективное окрашивание ауэрбаховского и мейсснеровского сплетений: гистаминеэргические нервы черные на бледном фоне. Объект обрабатывают в свежеприготовленной смеси, которую можно разбавить на одну треть: насыщенный раствор азотнокислой ртути 5 частей, дистиллированная вода—1—2 части, 2-процентная осмиевая кислота — 1 часть. Объект должен быть тонким, его можно растянуть на кусочке пробки или на рамке, сделанной из пробковой коры. Обрабатывают смесью 24— 48 часов, затем быстро споласкивают водой, заливают в парафин и изготовляют срезы.
ФЕРМЕНТЫ
Оксндазы
Для выявления в клетках окислительных ферментов предложен ряд методов. Все они основаны на том, что клетки обрабатываются определенными бесцветными реактивами или смесями реактивов, которые при окислении быстро дают на местах локализации оксидаз цветную реакцию (рис. 85). Ферменты чрезвычайно чувствительны к различным физическим и физнко-химяческим воздействиям. Поэтому реакции всегда нужно производить в строго определенных условиях. Для того, чтобы быть уверенным, что полученные результаты являются следствием действия ферментов, а не неорганических катализаторов, необходимо ставить контроль. Большинство окислительных ферментов разрушается после непродолжительного нагревания до 100° во влажной среде. Даже термостабильные пероксидазы.не выдерживают получасового нагревания до 120°. «Тепловая проба» представляет собой наиболее надежный контроль. Кроме того, можно пользоваться и другими способами: разрушение ферментов'при помощи ультрафиолетовых лучей или обработка препарата 0,1 — 1-процеитным раствором KCN.
Выявление так называемых «стабильных» оксидаз (м и е л о-н а д и-о кс и д а з н а я реакция). Метод основан на том, что смесь 1-процентного щелочного раствора а-нафтола и диметилпарафенилен-диамина с одним атомом кислорода образует лейкобазу. Если клетки обработать лейкобазой, то на месте локализации оксидаз образуется продукт ее окисления — индофеноловый синий.
261
Кусочки фиксировать формалином и резать на замораживающем микротоме. Мазки фиксировать в парах формола или в смеси: 1 часть формалина, 4 части 96-градусного спирта — в течение двух часов; окрашивать 1—5 минут в профильтрованной смеси равных частей а-нафтола и диметилпарафенилен-диамина. Гранулы, содержащие оксидазы, окрасятся в синий цвет. Можно на этом прервать обработку препарата, промыть водой и рассматривать в глицерине. «Нади» (т. е. смесь «-нафтола и диметилпа-рафенилен-диамина) действует только в присутствии кислорода. Поэтому реакцию надо проводить в открытой посуде, взбалтывая реактив.
Полученная окраска быстро исчезает. Для того, чтобы сделать ее стабильной, препарат нужно обработать следующим образом: обмыть дистиллированной водой; поместить в раствор Люголя, разбавленный двумя частями дистиллированной воды (гранулы окрашиваются сначала в коричневый цвет), — на 1—24 часа, пока гранулы не станут голубыми; поместить препарат в дистиллированную воду, к каждым 10 см3 которой прибавить
1—2 капли 0,5-процентного раствора углекислого лития; сполоснуть в дистиллированной воде; докрасить квасцовым кармином или сафранином; заключить в глицерин или глицерин-желатину. На местах локализации оксидаз видны голубые зерна, разбросанные в протоплазме.
Приготовление реактива: 1) 1 г а-нафтола кипятнть в 100 cms дистиллированной воды (а-нафтол при этом плавится); прибавлять по каплям 25-процентный раствор КОН, пока а-нафтол не растворится; 2) 0,5 г щелочного диметилпарафенилен-диамина растворить в 50 см* дистиллированной воды. Вместо основания можно применять солянокислый диметилпарафенилен-диамин. Он несколько более стоек. Оба раствора следует держать в плотно закрытых темных склянках. Сохраняются 2—3 недели. Непосредственно перед употреблением слить равные части обоих растворов и профильтровать. Необходимо иметь в виду, что реактив быстро портится, так как в нем выпадает нндофеноловый синий. Поэтому одной порцией реактива можно красить только несколько срезов или мазков. Основной раствор рекомендуют разводить вплоть до 1 : 1000.
Предыдущая << 1 .. 108 109 110 111 112 113 < 114 > 115 116 117 118 119 120 .. 214 >> Следующая