Книги
чёрным по белому
Главное меню
Главная О нас Добавить материал Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Археология Архитектура Бизнес Биология Ветеринария Военная промышленность География Геология Гороскоп Дизайн Журналы Инженерия Информационные ресурсы Искусство История Компьютерная литература Криптология Кулинария Культура Лингвистика Математика Медицина Менеджмент Металлургия Минералогия Музыка Научная литература Нумизматика Образование Охота Педагогика Политика Промышленные производства Психология Путеводители Религия Рыбалка Садоводство Саморазвитие Семиотика Социология Спорт Столярное дело Строительство Техника Туризм Фантастика Физика Футурология Химия Художественная литература Экология Экономика Электроника Энергетика Этика Юриспруденция
Новые книги
Янин В.Л. "Новгородские акты XII-XV Хронологический комментарий" (История)

Майринк Г. "Белый доминиканец " (Художественная литература)

Хусаинов А. "Голоса вещей. Альманах том 2" (Художественная литература)

Петров Г.И. "Отлучение Льва Толстого " (Художественная литература)

Хусаинов А. "Голоса вещей. Альманах том 1 " (Художественная литература)
Реклама

Микроскопическая техника - Роскин Г.И.

Роскин Г.И., Левинсон Л.Б. Микроскопическая техника — М.: Советская наука, 1957. — 469 c.
Скачать (прямая ссылка): microskopicheskayatehnika1957.djvu
Предыдущая << 1 .. 110 111 112 113 114 115 < 116 > 117 118 119 120 121 122 .. 214 >> Следующая

Пероксидазы
Реакцня с бензидииом. Метод Л е л е. Метод основан на том, что бснзидин в присутствии Н202 и пероксидазы переходит в коричневый оксибензидин. Пероксидазы значительно более устойчивы, чем оксидазы. Поэтому можно проводить реакцию не только на свежих нефиксированных тканях, но и после
264
фиксации их формолом или спиртом и заливки в желатину или даже в парафин.
1 г беизидина сильно встряхивают в 200 см3 дистиллированной воды; перед употреблением фильтруют; к 50 см3 этой жидкости прибавляют 1 см3 0,1-процентной перекиси водорода.
Мазки или замороженные срезы, приготовленные из материала, предварительно фиксированного формолом, на 3—5 минут помещают в раствор бензидина. На местах локализации пероксидаз появляются коричневые зерна. Раствор бензидина советуем слегка подкислить уксусной кислотой, тогда пероксидазы красятся в синий цвет; докрасить ядра; заключить в бальзам обычным способом.
Для парафиновых срезов применяют следующий метод.
После фиксации небольших кусочков в 10%-процентном формалине их быстро заливают в парафин: 70-градусный спирт —
1 час; ацетон — 30 минут, бензол — 20 минут, парафин — 20 минут. Тонкие срезы депарафииируют в бензоле — 20 секунд, затем в ацетоне— 10 секунд.
Срезы обрабатывают смесью (80-градусный спирт—25 см3-, бензидин — 0,1 г; перекись водорода — 2 капли), разведенной
2 частями дистиллированной воды — 5 минут. Помещают в воду — 5 минут; переносят в гематоксилин — 2 минуты, промывают водой— 1 минута; окрашивают 0,1 процентным эозином—20 секунд. Проводят через 96-градусный спирт — 30 секунд; абсолютный спирт—5 секуид, Просветляют ксилолом и заключают в бальзам.
а-нафтол — п е р о кс и д а з н а я реакция по Леле. <х-нафтал под действием H202 и пероксидазы окисляется в окрашенное вещество.
Кусочки фиксировать 10-процеитным формолом, резать на замораживающем микротоме; срезы на несколько минут поместить в следующий реактив: чайную ложку а-иафтола взболтать в 1 л 0,85-процентного раствора поваренной соли; оставить на 3 дня; перед употреблением 50 см3 профильтровать и прибавить к ним
1 см3 1-процентной перекиси водорода. Затем срезы сполоснуть и заключить в глицерин. Пероксидазы окрашиваются в темно-фиолетовый цвет. Выявляемые этим методом ферменты называют кафтолпероксидазами. Препараты, приготовленные таким способом, быстро выцветают. Чтобы сделать их более стойкими, применяют следующий метод: препараты на несколько минут помещают в смесь а-нафтола с генциановым фиолетовым (см. ниже); дифференцируют 50-градусным спиртом, пока пероксидазные зерна не будут окрашены в фиолетовый цвет, а весь остальной препарат не станет бесцветным. Заключают в глицерин. Для приготовления смеси а-нафтола с генциановым фиолетовым чайную ложку а-нафтола взбалтывают в 1 литре 0,85-процентного раствора поваренной соли. Полученный раствор а-нафтода отфильтро-
265
вывают и прибавляют по каплям насыщенный спиртовой раствор гендианового фиолетового до легкого помутнения жидкости; затем прибавляют по каплям 70-градусный спирт, пока жидкость снова не станет прозрачной. Этот метод основан на том, что зерна, содержащие фермент, окисляющий а-нафтол, обладают чрезвычайно большой базофидией. Они настолько энергично удерживают основные красители, что противостоят раскрашивающему действию спирта.
Метод Г. В. Эпштейна. Мазок фиксировать в смеси: 96-градусного спирта — 9 частей и формалина — 1 часть; промыть дистиллированной водой; налить на поверхность мазка на 3 минуты смесь следующего состава: 40-градусного спирта—¦ 100 см3, а-нафтола — 1 г, 3-процентиой перекиси водорода —¦ 0,2 см3-, промыть дистиллированной водой; окрашивать от 15 минут до нескольких часов следующей смесью: толуидинового синего — 1 г, лимоннокислого лития — 1 г, дистиллированной воды—100 см3', быстро сполоснуть дистиллированной водой; быстро (1 секунда) сполоснуть 1-процентным раствором таннина; высушить фильтровальной бумагой.
Зерна, содержащие пероксидазы, окрашиваются в ярко-зеленый цвет.
Метод Грехема быстро выявляет пероксидазкые гранулы в клетках на мазках (кровь, простейшие и т. п.).
Влажные или высушенные мазки фиксировать I—2 минуты в смеси: формалина — 1 часть, 96-градусного спирта — 9 частей; промыть в воде; красить 4—5 минут в 1-процентном растворе, а-нафтола в 40-градуском спирте (к 100 см3 этого раствора прибавить 0,2 см3 3-процентной перекиси водорода); промывать 15 минут в проточной воде; красить 2 минуты в смеси: 0,1 г пи-ронииа, 4 см3 анилина н 96 см3 40-градусного спирта; промыть в воде; красить 30—60 секунд в 0.5-процентном водном растворе метиленового синего; промыть в воде, провести через спирты, ксилол, заключить в бальзам.
Зерна нейтрофилов, эозинофилов и базофилов, дающие п е-роксидазную реакцию, соответственно пурпурио-красные, светло-красные и пурпурные. Протоплазма и ядра клеток — синие и голубые, эритроциты —красновато-желтые.
Сукцинод егид р аз а
Предыдущая << 1 .. 110 111 112 113 114 115 < 116 > 117 118 119 120 121 122 .. 214 >> Следующая