Книги
чёрным по белому
Главное меню
Главная О нас Добавить материал Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Археология Архитектура Бизнес Биология Ветеринария Военная промышленность География Геология Гороскоп Дизайн Журналы Инженерия Информационные ресурсы Искусство История Компьютерная литература Криптология Кулинария Культура Лингвистика Математика Медицина Менеджмент Металлургия Минералогия Музыка Научная литература Нумизматика Образование Охота Педагогика Политика Промышленные производства Психология Путеводители Религия Рыбалка Садоводство Саморазвитие Семиотика Социология Спорт Столярное дело Строительство Техника Туризм Фантастика Физика Футурология Химия Художественная литература Экология Экономика Электроника Энергетика Этика Юриспруденция
Новые книги
Янин В.Л. "Новгородские акты XII-XV Хронологический комментарий" (История)

Майринк Г. "Белый доминиканец " (Художественная литература)

Хусаинов А. "Голоса вещей. Альманах том 2" (Художественная литература)

Петров Г.И. "Отлучение Льва Толстого " (Художественная литература)

Хусаинов А. "Голоса вещей. Альманах том 1 " (Художественная литература)
Реклама

Микроскопическая техника - Роскин Г.И.

Роскин Г.И., Левинсон Л.Б. Микроскопическая техника — М.: Советская наука, 1957. — 469 c.
Скачать (прямая ссылка): microskopicheskayatehnika1957.djvu
Предыдущая << 1 .. 111 112 113 114 115 116 < 117 > 118 119 120 121 122 123 .. 214 >> Следующая

Сукцинодегидраза широко распространена в животных и растительных клетках, образуя вместе с цитохромом и цитохро-моксидазой энзиматическую систему. Этот фермент участвует в цепи сложных реакций, происходящих при окислении жиров, углеводов и белков.
В нашей лаборатории была разработана методика гистохимического определения сукцинодегидразы в различных тканях. Для этого из нефиксированного материала изготовляют срезы на замораживающем микротоме. Затем тщательно промывают их дистиллированной водой для удаления растворимых веществ, могущих влиять на восстановление метиленового синего. После этого срезы окрашивают в смесн: 2 см3 0,05-процентной метиленового синего и
266
2 сж3 10-процентного янтарнокислого натрия, к которой доливают фосфатную буферную смесь по Серенсену, с pH 7,6—8,0 — до 10 см'*.
Концентрация янтариокислого натрия может несколько варьировать. В случае более высокой концентрации янтарнокислого натрия реакция обесцвечивания метиленового синего идет быстрее.
Окраска срезов в смеси продолжается 10—15 минут, затем их переносят на предметное стекло с 1—2 каплями этой смеси и покрывают покровным стеклом так, чтобы под ним не осталось пузырька воздуха.
Края покровного стекла тщательно заливают парафином для достижения анаэробных условий. Таким образом создается анаэробная микрокамера, в которой происходит связанный с окислением янтарной кислоты процесс перехода метиленового синего в лейкооснование.
Отмечая скорость обесцвечивания метиленового синего в различных клетках и тканях, можно установить, в каких элементах тканей сукцинодегидраза действует активней.
Предварительное нагревание ткани в термостате при температуре 60—80° в течение 5—15 минут полностью уничтожает способность клеток давать вышеописанную реакцию. Цианистый калий в концентрациях 0,01 и 0,001 % также совершенно инактивирует сукцинодегидразу. Изменение pH влияет на скорость обесцвечивания метиленового синего кусочками ткани; оптимальное pH равнб 7,6—8,0.
Концентрация янтарнокислого натрия влияет на скорость реакции: чем меньше концентрация этой соли, тем медленнее идет процесс.
В большинстве тканей кролика и мыши нельзя отметнть разницу между скоростью реакции в ядре и цитоплазме, однако в гладкой мускульной ткани желудка такое различие существует.
В некоторых тканях реакция протекает равномерно в различных участках, в других тканях — эта реакция идет неравномерно, т. е. отдельные участки обесцвечиваются быстрее других; к таким тканям относятся, например: 1) печень, где отдельные дольки обесцвечиваются быстрее, другие медленнее; 2) волокна поперечнополосатой мускулатуры.
Весьма интересные результаты дает реакция иа сукцинодегидразу в клетках крови.
В табл. 7 приведены результаты наблюдения иад клетками крови человека.
Реакция по Зелигману и Рутенбургу (1951). Основана на том, что хлористый тритетразолий в присутствии соответствующего субстрата ведет себя как акцептор водорода, причем восстанавливается в синий, нерастворимый в воде, диформазан. Замороженные срезы (штук 10—15) инкубируют в течение 2 часов (при 37°) в 20 см3 следующего реактива: хлористый тетразолнй
267
Таблица 7
РЕАКЦИЯ НА СУХЦИНОДЕГИДРАЗУ В КЛЕТКАХ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА (по данным Г. И. Роскина и М. Е. Струве)
Название Начало Конец Примечание
обесцвечивания обесцвечивания
Нейтрофилы: 1 Ч.--- 1 ч. 30 М. 3---4 часа Ядра нейтрофи-
Ядра.....
Плазма и зерни Бесцветны Бесцветны лов к концу обес
цвечивания сильно
разбухают
стость ...... 1 час 3---4 часа Ядра обесцвечи-
Эозинофилы:
Ядра.....
Плазма и зерни Плазма бес Плазма бес ваются не полно
стью, остается го
лубая окраска.
Зернистость ок>
стость ...... цветна цветна рашивается в жел
Базофилы: 1 час, зерни 3 часа, зерни* товатый цвет
Ядра.....
Плазма и зерни стость синяя стость синяя Плазма бесцвет
Плазма бес Плазма бес
стость ...... цветна цветна ная до и после
Лимфоциты 1 час Через 5---6 часоп реакции
малые, сред Ядрышки оста
ние, большие
Ядра.....
Предыдущая << 1 .. 111 112 113 114 115 116 < 117 > 118 119 120 121 122 123 .. 214 >> Следующая