Книги
чёрным по белому
Главное меню
Главная О нас Добавить материал Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Археология Архитектура Бизнес Биология Ветеринария Военная промышленность География Геология Гороскоп Дизайн Журналы Инженерия Информационные ресурсы Искусство История Компьютерная литература Криптология Кулинария Культура Лингвистика Математика Медицина Менеджмент Металлургия Минералогия Музыка Научная литература Нумизматика Образование Охота Педагогика Политика Промышленные производства Психология Путеводители Религия Рыбалка Садоводство Саморазвитие Семиотика Социология Спорт Столярное дело Строительство Техника Туризм Фантастика Физика Футурология Химия Художественная литература Экология Экономика Электроника Энергетика Этика Юриспруденция
Новые книги
Янин В.Л. "Новгородские акты XII-XV Хронологический комментарий" (История)

Майринк Г. "Белый доминиканец " (Художественная литература)

Хусаинов А. "Голоса вещей. Альманах том 2" (Художественная литература)

Петров Г.И. "Отлучение Льва Толстого " (Художественная литература)

Хусаинов А. "Голоса вещей. Альманах том 1 " (Художественная литература)
Реклама

Микроскопическая техника - Роскин Г.И.

Роскин Г.И., Левинсон Л.Б. Микроскопическая техника — М.: Советская наука, 1957. — 469 c.
Скачать (прямая ссылка): microskopicheskayatehnika1957.djvu
Предыдущая << 1 .. 114 115 116 117 118 119 < 120 > 121 122 123 124 125 126 .. 214 >> Следующая

18 Микроскопическая техника 273
Интересно отметить, что ядра простейших в отличие от ядер многоклеточных животных дают отрицательную реакцию с лейко-базой метиленового синего.
Так же ведут себя некоторые эмбриональные клетки (например, клетки эмбриона цыпленка, в отличие от ядер клеток взрослой курицы). У взрослого животного также имеются клетки, ядра которых едва окрашиваются лейкобазой, например, фибробласты мыши. В печеночных клетках мыши бледно окрашивается ядро, а интенсивно — плазма.
Для приготовления гипосульфитиой лейко-базы метиленового синего берут 800 мг гипосульфита, 10 см3 водного раствора 0,1-процентного метиленового синего и
3—4—5 капель соляной кислоты (удельный вес 1,17), разведенной дистиллированной водой 1 : 3. Лучший результат окраски дает лей-кобаза с четырьмя каплями соляной кислоты; с меньшим количеством кислоты лейкобаза получается нестойкой, она быстро становится голубой и непригодной для окраски срезов. Раствор метиленового синего готовят па бидистиллированной воде и перед употреблением тщательно фильтруют.
Гипосульфит применяют химически чистый; обычный же продажный гипосульфит необходимо растворить в дистиллированной воде, профильтровать и затем перекристаллизовать; такой пере-кристаллнзованный и высушенный гипосульфит надо хранить в байке с притертой пробкой.
При изготовлении лейкобазы нужно строго соблюдать следующий способ: 800 мг гипосульфита насыпают в чистую колбочку; (посуда должна быть абсолютно чистой, сухой; предварительно ее ополаскивают бидистиллированной водой), затем наливают 10 см3
0,1-процентного раствора метиленового синего. После тото как гипосульфит полностью растворится (несколько раз взбалтывать), в колбочку добавляют 4 капли указанного раствора соляной кислоты. Колбочку со смесью взбалтывают при осторожном подогревании на горелке (20—30 секунд) до появления в ней серо-молочио-го осадка. Затем дают раствору остыть (5—10 минут) и тщательно фильтруют через двойной фильтр. Воронка, как и вся остальная посуда, должна быть абсолютно чистой, иа ней не должно быть следов метиленового синего, иначе профильтрованная лейкобаза будет голубой и обесцвечивания раствора не наступит. Если профильтрованная лейкобаза примет голубой оттенок, надо поставить ее иа некоторое время в темноту. Лейкобазу метиленового синего следует готовить перед употреблением, но ее можно сохранять 10—12 часов в темноте.
Правильно приготовленная лейкобаза бесцветна или имеет слегка желтоватый тон- Только такая лейкобаза годна для окрашивания срезов.
Срезы изготовляются из свежих, нефиксированных кусочков ткани с помощью замораживающего микротома. Толщи-
274
на срезов 10—15 ц. Кусочки нормальных или патологических тканей можно перед изготовлением срезов хранить в рефрижераторе (от +2° до —2°) в физиологическом растворе поваренной соли в течение 1—2 дней.
Изготовленные срезы переносят в бактериологическую чашку с физиологическим раствором поваренной соли. Затем с помощью пипетки срез переносят на предметное стекло (избыток физиологического раствора поваренной соли отсасывают фильтровальной бумагой), расправляют срез препаровальными иглами и подсушивают при комнатной температуре. Одновременно рядом со срезом опухолевой или иной патологической ткани таким же образом наклеивают срез нормальной ткани (например, почка или сердце мыши), который служит для контроля эффекта окрашивания. Такие подсушенные срезы готовы для окраски, которую можно проводить тотчас же или через 1—2 дня. Подсушенные срезы злокачественных опухолей сохраняют свою способность к типичному окрашиванию лейкобазой в течение двух недель при условии хранения их в сухом и темном месте.
Окрашивание срезов производят следующим образом: раствор лейкобазы с помощью пипетки наливают на предметное стекло с наклеенными срезами. Лейкобаза должна быть бесцветной в течение всего времени окрашивания. Если раствор лейкобазы голубеет, его необходимо сменить. Красить надо до тех пор, пока срез нормальной ткани четко окрасится в синнй цвет; орез раковой ткани должен оставаться бесцветным. Затем надо слнть лейкобазу, промыть срезы большим количеством бидистиллирован-ной воды, после чего налить на них 0,05-процонтного водного раствора кислого фуксина.
Красить кислым фуксином надо 2—3 минуты, избегая перекрашивания срезов. Слив кислый фуксин, дают срезам хорошенько просохнуть.
Рассматривать их можно в глицерине или заключать в глицерин-желатину. Можно также готовить постоянные препараты, заключая подсушенные срезы в чистое парафиновое масло и обрамляя покровное стекло рамкой из соответствующей массы (асфальтовый лак и т. п.). Можно заключить их и в канадский бальзам, но он должен быть нейтральным, иначе срезы раковых тканей быстро синеют.
Окрашивание лейкобазой метиленового синего требует строгого соблюдения световых условий: весь процесс окрашивания необходимо проводить в затемненном помещении. Яркое освещение может извратить эффект окрашивания, так как раствор лейкобазы на свету изменяется. И, наконец, повторяем: окрашивать срезы можно только бесцветным раствором лейкобазы, в противном случае результаты окраски будут ошибочными. При правильном проведении метода различия между злокачественной и нормальной тканью видны и макроскопически: нормальная ткань синяя, а срез алокачествеиной ткани — красный.
Предыдущая << 1 .. 114 115 116 117 118 119 < 120 > 121 122 123 124 125 126 .. 214 >> Следующая