Книги
чёрным по белому
Главное меню
Главная О нас Добавить материал Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Археология Архитектура Бизнес Биология Ветеринария Военная промышленность География Геология Гороскоп Дизайн Журналы Инженерия Информационные ресурсы Искусство История Компьютерная литература Криптология Кулинария Культура Лингвистика Математика Медицина Менеджмент Металлургия Минералогия Музыка Научная литература Нумизматика Образование Охота Педагогика Политика Промышленные производства Психология Путеводители Религия Рыбалка Садоводство Саморазвитие Семиотика Социология Спорт Столярное дело Строительство Техника Туризм Фантастика Физика Футурология Химия Художественная литература Экология Экономика Электроника Энергетика Этика Юриспруденция
Новые книги
Янин В.Л. "Новгородские акты XII-XV Хронологический комментарий" (История)

Майринк Г. "Белый доминиканец " (Художественная литература)

Хусаинов А. "Голоса вещей. Альманах том 2" (Художественная литература)

Петров Г.И. "Отлучение Льва Толстого " (Художественная литература)

Хусаинов А. "Голоса вещей. Альманах том 1 " (Художественная литература)
Реклама

Микроскопическая техника - Роскин Г.И.

Роскин Г.И., Левинсон Л.Б. Микроскопическая техника — М.: Советская наука, 1957. — 469 c.
Скачать (прямая ссылка): microskopicheskayatehnika1957.djvu
Предыдущая << 1 .. 133 134 135 136 137 138 < 139 > 140 141 142 143 144 145 .. 214 >> Следующая

Метод серебрения по Ранвье. Можно обрабатывать только покровные ткани. 1. Свежую нефиксированную кожицу растягивают при помощи неметаллических игол и обмывают в дистиллированной воде. 2. Помещают в 0,5-процентный раствор азотнокислого серебра и держат в нем до тех пор, пока объекты сделаются непрозрачными — около 5 минут. 3. Переносят их в большую чашку с дистиллированной водой и держат на свету до потемне-ння объекта ( до восстановления серебра). 4. Промывают в дистиллированной воде. 5. Исследуют в глицерине или обезвоживают, проводят через ксилол и заключают в бальзам.
Результат: границы клеток — черные.
Водный сини й-о р с е и н-э о з и н для выявления клеточных границ, мерцательных ресничек и базальной мембраны.
1. Материал фиксируют в формалине или в сулемовой смеси, приготовляют парафиновые срезы, освобождают от парафина, доводят до 96-градусного спирта. 2. Окрашивают в растворе водного синего-орсеин-эозина 10 минут. П е р в ы й р а с т в о р: растворяют 1 г водного синего в 100 смъ дистиллированной воды и 1 е орсеина в 50 смъ 96-градусного спирта, оба красителя смешивают и добавляют 20 см3 глицерина и 5 см3 уксусной кислоты. Второй раствор: ] г эозина растворяют в 80 см3 абсолютного спирта.
315
Перед употреблением к 10 частям первого раствора прибавляют 3’части второго. 3. Срезы споласкивают в дистиллированной воде.
4. Окрашивают в 1-процентном растворе сафранина 10 минут,
5. Споласкивают в дистиллированной воде. 6. Погружают в 0,5-процентиый раствор двухромовокислого калия на 10—15 секунд.
7. Промывают в дистиллированной воде. 8. Переносят непосредственно в абсолютный спирт, дифференцируют в нем, контролируя под микроскопом. 9. Проводят через ксилол, заключают в бальзам.
Митохондрии
На многих объектах прижизненное наблюдение митохондрий не представляет больших трудностей, но при этом нужно обращать особое внимание на изотонию среды; часто наличие малейшей гипотонии ие влияет заметным образом на жизненное состояние клетки, значительно изменяет форму митохондрий.
О прижизненной окраске митохондрий см. стр. 73. Для прижизненного изучения митохондрий следует использовать микроско-пирование в темном поле и фазов о-к онтрастную микроскопию.
При изучении митохондрий существенное значение имеет состав фиксирующей смеси. Присутствие в фиксаторе таких веществ, как спирт, эфир, хлороформ, уксусная кислота, разрушающе действует на митохондрии. Наиболее пригодны фиксаторы формол-хромовые или хромово-осмиевые. Нет единого фиксатора для митохондрий, одинаково пригодного для клеток различных животных. Нередко метод, дающий хорошие результаты для тканей амфибий, может быть мало применим для тканей млекопитающих. Для клеток беспозвоночных наиболее пригодны смесь Флемминга (без уксусной кислоты) или Шампи. Смесь Шампи дает хорошие результаты также и для клеток амфибий. Для тканей млекопитающих рекомендуют употреблять фиксатор Бенсли. При изучении нового материала всегда желательно сравнить результаты нескольких фиксаторов. В некоторых случаях хорошие результаты получаются после фиксации смесями Мевеса или Бенда, являющимися модификациями смесей Флемминга, но содержащими весьма малое количество кислоты.
После осмиевых фиксаторов многие исследователи рекомендуют подвергать препараты отбеливанию, чем достигается более контрастная дифференцировка митохондрий и аппарата Голь-джи. Неокрашенные срезы помещают в 1-процентный раствор перманганата па 30—60 секунд, быстро споласкивают дистиллированной водой и переносят срезы в 5-процептный раствор щавелевой кислоты на 30—60 секунд, после чего тщательно промывают их проточной водой.
В некоторых случаях при изготовлении препаратов из мелких объектов, предназначаемых для исследований митохондрий, можно рекомендовать метод ускоренной заливки в парафин: спирт 15-
3]6
градусный — 10 минуг, спирт 40-градусный— 15 минут, спирт 50-градусный— 15 минут, спирт 70-градусный — 30 минут, спирт 90-градусный— 1 час, спирт 100-градусиый — 2 часа (1 раз сменить), толуол — 2 часа (1 раз сменить), толуол + парафин — 2 часа (1 раз сменить), чистый парафин — 2 часа (1 раз сменить).
Для фиксации митохондрий хорошие результаты дает следующая смесь: 5-процентный двухромовокислый калий — 6 частей, 2-процентная осмиевая кислота — 5 частей, 5-процеитиая сулема в физиологическом растворе поваренной солн — 5 частей, 4-процентный азотнокислый уран — 4 части. Фиксировать на холоду (+6°, +8°), 24—48 часов. Затем промывать в воде 12—24 часа. Фиксатор сохраняет митохондрии и липоидные вещества.
Методы окраски митохондрий. Рекомендуют фиксировать маленькие кусочки в смеси Флемминга (без уксусной кислоты) 24 часа, промывать 2 часа в проточной воде. Проводить через спирты, начиная с 30°. Обезвоживать в абсолютном спирте 2— 3 часа, перенести иа короткое время в смесь ксилола и спирта, затем через ксилол заливать в парафин. Срезы (4—8 и-) красить железным гематоксилином (12 часов в железных квасцах и 12 часов в гематоксилине).
Предыдущая << 1 .. 133 134 135 136 137 138 < 139 > 140 141 142 143 144 145 .. 214 >> Следующая