Книги
чёрным по белому
Главное меню
Главная О нас Добавить материал Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Археология Архитектура Бизнес Биология Ветеринария Военная промышленность География Геология Гороскоп Дизайн Журналы Инженерия Информационные ресурсы Искусство История Компьютерная литература Криптология Кулинария Культура Лингвистика Математика Медицина Менеджмент Металлургия Минералогия Музыка Научная литература Нумизматика Образование Охота Педагогика Политика Промышленные производства Психология Путеводители Религия Рыбалка Садоводство Саморазвитие Семиотика Социология Спорт Столярное дело Строительство Техника Туризм Фантастика Физика Футурология Химия Художественная литература Экология Экономика Электроника Энергетика Этика Юриспруденция
Новые книги
Цуканов Б.И. "Время в психике человека" (Медицина)

Суворов С. "Танк Т-64. Первенец танков 2-го поколения " (Военная промышленность)

Нестеров В.А. "Основы проэктирования ракет класса воздух- воздух и авиационных катапульных установок для них" (Военная промышленность)

Фогль Б. "101 вопрос, который задала бы ваша кошка своему ветеринару если бы умела говорить" (Ветеринария)

Яблоков Н.П. "Криминалистика" (Юриспруденция)
Реклама

Микроскопическая техника - Роскин Г.И.

Роскин Г.И., Левинсон Л.Б. Микроскопическая техника — М.: Советская наука, 1957. — 469 c.
Скачать (прямая ссылка): microskopicheskayatehnika1957.djvu
Предыдущая << 1 .. 134 135 136 137 138 139 < 140 > 141 142 143 144 145 146 .. 214 >> Следующая

Этот метод особо пригоден для половых клеток и тканей беспозвоночных.
Хорошие результаты окраски митохондрий дает способ Бенда — Икела, описанный ранее.
Метод Альтмана — один из наиболее старых способов окраски митохондрий. Иногда дает отличные результаты. Следует брать маленькие кусочки, толщиной не более 2 мм.
1. Фиксация жидкостью Альтмана. 2. Тонкие срезы красить фуксином Альтмаиа (20-процентный раствор кислого фуксина в анилиновой воде), наливая краситель на предметное стекло и нагревая на пламени горелки до появления паров; нагревание провести 2 раза, затем остудить краситель и слить его с препарата.
3. Дифференцировать под контролем микроскопа (пока не выступят ярко-красные митохондрии — обычно 1—4 минуты), сначала в более крепком растворе пикриновой кислоты (10 см3 насыщенного спиртового раствора пикриновой кислоты и 40 смъ 20-градусного спирта), затем в более слабом (10 смъ насыщенного спиртового раствора пикриновой кислоты и 70 см3 20-градусного спирта). Хорошо промыть в 96-градусном спирте. 4. Провести через абсолютный спирт, ксилол, заключить в бальзам.
В результате— митсхондрии красные иа желтом фоне.
С. С. В а й л ь предлагает следующую модификацию метода Альтмана: после окраски срезов фуксином, споласкивают их в воде и дифференцируют в слабом нашатырном спирте (под контролем микроскопа). Если дифференцировка идет слишком медленно, добавляют по каплям нашатырный спирт. Лучше сильно перекрашивать срезы фуксином и дифференцировать их в нашатырном спирте средней крепости.
317
Затем споласкивают срезы в воде и докрашивают ядра гематоксилином Эрлиха. Вайль рекомендует окрашивать гематоксилином срезы, слегка перекрашенные фуксином, а гематоксилин дифференцировать соляной кислотой. Тогда при нейтрализации кислоты аммиаком будет извлечен и избыток фуксина. Хорошо докрашивать также и насыщенным водным раствором светлого зеленого, при этом митохондрии выявляются весьма контрастно.
Метод Волконского является одним из лучших способов окраски митохондрий.
1. Материал фиксировать смесью Гелли. 2. Хромировать в насыщенном растворе двухромовокислого калия 24—48 часов при температуре 37е. 3. Срезы красить фуксином Альтмана. 4. Дифференцировать ауранцией по Шампи — Кулю. 3. Сполоснуть в дистиллированной воде. 6. Поместить в 1-процентную фосфорномолибденовую кислоту ка 1 минуту (для закрепления кислого фуксина на митохондриях). 7. Красить полихромным синим. 8. Дифференцировать оранж-таннином. 9. Провести через абсолютный спирт, ксилол, заключить в бальзам.
Метод Бенда. Фиксировать маленькие кусочки в смесях Бенда, Флемминга или Шампи несколько дней. Промывать сутки в проточной воде и поместить на сутки в смесь из равных частей древесного уксуса и 1-процентной хромовой кислоты, затем перенести в 2-процентный двухромовокислый калий на срок от одного до трех дней, сполоснуть дистиллированной водой и промывать 24 часа в проточной воде. Быстро залить в парафин. Тонкие срезы (3—5 (*) поместить на 24 часа в 4-процентные железоаммиачные квасцы. Сполоснуть срезы в дистиллированной воде и поместить на 24 часа в ализарин-сернокислый натрий (насыщенный водный раствор его капают в дистиллированную воду, пока она не станет янтарно-желтой; лучше пользоваться бидистиллированной водой; раствор следует готовить непосредственно перед употреблением). Сполоснуть в дистиллированной воде. На срезы налить 3-процентный раствор кристаллического фиолетового в 70-градусном спирте, смешанного с равным количеством анилиновой воды и нагреть над пламенем горелки до появления паров (не кипятить!). Оставить в красителе еще 3—5 минут. Краситель смыть водой и препарат дифференцировать под контролем микроскопа (обычно 1—5 минут) 10—30-процентной уксусной кислотой. Промывать 5—10 минут проточной водой, чтобы удалить уксусную кислоту и прекратить дифференцировку — при этом срезы краснеют. Промокнуть срезы гладкой фильтровальной бумагой, сполоснуть абсолютным спиртом, перенести в бергамотовое масло, ксилол, заключить в бальзам.
Кристаллический фиолетовый легко извлекается спиртом, поэтому важно соблюдать осторожность в момент обезвоживания препарата. Если срезы передифференцировать, можно их вновь окрасить кристаллическим фиолетовым и повторить дальнейшие манипуляции.
318
В результате ядро и цитоплазма — красно-коричневые, секреторные гринулы — сине-фиолетовые, митохондрии — интенсивно фиолетовые. Волютин у простейших — красно-фиолетовый. Фибриллярные структуры простейших окрашиваются в различные оттенки фиолетового цвета. При тщательном выполнении метод Бенда дает отличные результаты.
Метод Шампи — К у л я- 1. Материал фиксировать смесью Шампи — 24 часа (маленькие кусочки ткани). Затем промывать его в дистиллированной воде полчаса и переложить на 24 часа в смесь из 1 части древесного уксуса и двух частей 1-процентной хромовой кислоты. Промывать полчаса в дистиллированной воде и поместить на 3 дня в 3-процентный двухромовокислый калий, затем промывать 24 часа в проточной воде, после чего залить в парафин. 2. Срезы красить фуксином Альтмана (примерно 5— 10 минут), после чего сполоснуть их дистиллированной водой.
Предыдущая << 1 .. 134 135 136 137 138 139 < 140 > 141 142 143 144 145 146 .. 214 >> Следующая