Книги
чёрным по белому
Главное меню
Главная О нас Добавить материал Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Археология Архитектура Бизнес Биология Ветеринария Военная промышленность География Геология Гороскоп Дизайн Журналы Инженерия Информационные ресурсы Искусство История Компьютерная литература Криптология Кулинария Культура Лингвистика Математика Медицина Менеджмент Металлургия Минералогия Музыка Научная литература Нумизматика Образование Охота Педагогика Политика Промышленные производства Психология Путеводители Религия Рыбалка Садоводство Саморазвитие Семиотика Социология Спорт Столярное дело Строительство Техника Туризм Фантастика Физика Футурология Химия Художественная литература Экология Экономика Электроника Энергетика Этика Юриспруденция
Новые книги
Янин В.Л. "Новгородские акты XII-XV Хронологический комментарий" (История)

Майринк Г. "Белый доминиканец " (Художественная литература)

Хусаинов А. "Голоса вещей. Альманах том 2" (Художественная литература)

Петров Г.И. "Отлучение Льва Толстого " (Художественная литература)

Хусаинов А. "Голоса вещей. Альманах том 1 " (Художественная литература)
Реклама

Микроскопическая техника - Роскин Г.И.

Роскин Г.И., Левинсон Л.Б. Микроскопическая техника — М.: Советская наука, 1957. — 469 c.
Скачать (прямая ссылка): microskopicheskayatehnika1957.djvu
Предыдущая << 1 .. 140 141 142 143 144 145 < 146 > 147 148 149 150 151 152 .. 214 >> Следующая

Наклеенные и освобожденные от парафина срезы можно обезжирить, помещая их на 1—3 дня в бензин при температуре 37°, затем провести через спирты, промыть в воде 10—20 минут и после этого поместить в переваривающую жидкость (к 0,3 г трипсина на 100 см3 0,3-процентного раствора углекислой соды прибавляют 2—3 см3 толуола; наилучшее воздействие при 37—40°), После этого производят промывку в проточной воде, протравляют срезы в 0,5-процентном водном растворе Ferridammonium tartari-cum в течение 1—24 часов, затем снова промывают нх водой и перекладывают на 3—24 часа в 0,5-процентный водный раствор зрелого гематоксилина; споласкивают водой. Если после спола-скнвания красителя окажется, что перекладины сети все еще не приобрели черного цвета, то препарат снова кладется на 20— 30 минут в свежеприготовленный раствор протравы.
Пепсином перевар ива ют с я коллагеновые волокна соединительной ткани, хряща, кости, также ретикулиновая ткань и роговая субстанция ногтей. Напротив, эластическая ткань дольше противостоит действию пепсина, а нейрокератин, хитин, жир и углеводы совсем не перевариваются им.
Трипсином переваривается эластическая ткань, муцин, хондромукоид, а также большинство обычных белковых тел. Напротив, не изменяются или почти не изменяются (в зависимости от времени воздействия) коллагеновые волокна соединительной ткани, хряща, кости, ретикулиновая ткань, роговая субстанция, хитин, жир и углеводы.
Время действия переваривающего фермента может быть различно в зависимости от изучаемого объекта, размеров кусочка, возраста животного и т. д. Если процесс переваривания производится иа срезах, то необходимо время от времени контролировать его под микроскопом. Надо также помнить, что метод переваривания может найти значительное применение не только при анализе соединительнотканных элементов, но и при решении гистофизио логических вопросов, касающихся самых различных ткаией.
Оставшиеся после переваривания ферментами структуры окра-
329
шивают, в зависимости от вида ткани, железным гематоксилином, молибденовым гематоксилином, гематоксилином с докраской кислым фуксином с пикриновой кислотой, также по методу Маллори или орсеииом и т. д. в зависимости от целей исследования.
Окрашивание соединительной ткани
Среди методов окрашивания соединительной ткани на первом месте стоит азанов ы й метод Гейденгайна.
Особенно хорошо удается этот метод после фиксации материала в сулеме с ледяной уксусной кислотой, сулеме с трихлор-уксусной кислотой, ценкеровской жидкости и ее модификациях, а также после фиксации в жидкости Буэна. После обыкновенной формалиновой фиксации также получаются хорошие результаты окрашивания. Важно отметить, что качество окраски зависит от лорошей промывки материалов после фиксаторов.
1. Освобожденные от парафина срезы помещают из воды в азокармин. Окрашивание производится 45—60 минут в термостате, в плотно закрытой стеклянной посуде при температуре 50—60°. Затем срезы 5—10 минут охлаждают при комнатной температуре. Если раствор красителя предварительно нагреть, то время окрашивания в термостате можно сократить до 10— 15 минут. 2. Споласкивают в дистиллированной воде. 3. Дифференцируют в спиртовом растворе анилина (1 сж3 анилинового масла на 1000 сж3 90-градусного спирта). Дифференцируют до четкого выявления ядер; этот процесс можно ускорить, прибавляя немного дистиллированной воды к анилиновому раствору.
4. Далее производится непродолжительное отмывание анилина в уксуснокислом спирте (1 см3 ледяной уксусной кислоты на 100 см3 96-градусного спирта) от 0,5 до 1 минуты. Если ткань, несмотря на произведенную дифференцировку, еще сильно окрашена в красный цвет, то препарат снова помещают в спиртовый раствор анилина. 5. После этого следует протравление в 5-процентной фосфорновольфрамовой кислоте (1—3 часа), где соединительная ткань еще больше обесцвечивается (фосфорновольфрамовая кислота должна быть химически чистой). 6. Затем быстро споласкивают в дистиллированной воде. 7. Окрашивают в смеси анилинового синего — оранжа G — уксусной кислоты в течение 1—3 часов. 8. Споласкивают в воде, дифференцируют в SO-градусном спирте; затем проводят через абсолютный спирт, ксилол, заключают в бальзам.
Для выявления очень тонких волокон срезы не споласкивают в воде, а сразу погружают в 96-градусный спирт; затем помещают в абсолютный спирт и т. д.
Коллагеновые и ретикулярные волокна, соединительная ткань окрашиваются в интенсивно синий свет; хроматин — в красный; мышечная ткань (в зависимости от фиксации)—в красноватый с переходами до оранжевого; эритроциты окрашиваются в красный цвет; нейроглия — в красноватый, слизь — в синий. Зерни-
330
стости. клеток, в зависимости от их консистенции, окрашиваются— в желтый, красный или синий цвет.
Приготовление красящих растворов для азанового метода. Азокармин имеется в продаже в виде нзокармипа В и G. Первый легко растворяется в воде. Употребляется он в 0,25—1-процентном водном растворе, на 100 смл которого прибавляют 1 см'3 ледяной уксусной кислоты. Обычно рекомендуют более трудно растворимый азокармин G. 0,1-процентный водный раствор последнего кипятят н после охлаждения фильтруют через неплотный фильтр.
Предыдущая << 1 .. 140 141 142 143 144 145 < 146 > 147 148 149 150 151 152 .. 214 >> Следующая