Книги
чёрным по белому
Главное меню
Главная О нас Добавить материал Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Археология Архитектура Бизнес Биология Ветеринария Военная промышленность География Геология Гороскоп Дизайн Журналы Инженерия Информационные ресурсы Искусство История Компьютерная литература Криптология Кулинария Культура Лингвистика Математика Медицина Менеджмент Металлургия Минералогия Музыка Научная литература Нумизматика Образование Охота Педагогика Политика Промышленные производства Психология Путеводители Религия Рыбалка Садоводство Саморазвитие Семиотика Социология Спорт Столярное дело Строительство Техника Туризм Фантастика Физика Футурология Химия Художественная литература Экология Экономика Электроника Энергетика Этика Юриспруденция
Новые книги
Янин В.Л. "Новгородские акты XII-XV Хронологический комментарий" (История)

Майринк Г. "Белый доминиканец " (Художественная литература)

Хусаинов А. "Голоса вещей. Альманах том 2" (Художественная литература)

Петров Г.И. "Отлучение Льва Толстого " (Художественная литература)

Хусаинов А. "Голоса вещей. Альманах том 1 " (Художественная литература)
Реклама

Микроскопическая техника - Роскин Г.И.

Роскин Г.И., Левинсон Л.Б. Микроскопическая техника — М.: Советская наука, 1957. — 469 c.
Скачать (прямая ссылка): microskopicheskayatehnika1957.djvu
Предыдущая << 1 .. 155 156 157 158 159 160 < 161 > 162 163 164 165 166 167 .. 214 >> Следующая

358
I
В этом случае нервные элементы совершенно не подвергаются сморщиванию.
Обработка нервной ткани по методу Д. И. Дейнека: 1. Фиксация кусочков (20—90 минут) в смеси: 96-градусный илн 100-градусный спирт—30 см3, насыщенный раствор мышьяковистой кислоты — 30 см3, нейтральный формалин 20-процентный — 30 см3. 2. Слегка обсушить кусочки фильтровальной бумагой. 3. 2-процептный AgN03 (в баночке коричневого стекла) — 18 дней и больше; объекты держать при комнатной температуре. 4. Дистиллированная вода (1—3 минуты). 5. Восстанавливают (24 часа) серебро в смеси: гидрохинон 2 г. Na2S03—
0,5 г, нейтральный формалин продажный — 5 см3, дистиллированная вода — 95 см3. 6. Промывка в дистиллированной воде (1—3 минуты). 7. Проводят через спирты возрастающей крепости; 100°— 12 часов, 100° +эфир — 2 часа. 8. Целлоидин 6% — 1— 3 дня (не больше!), густой целлоидин (8%) — 1 час. Заливка в густой целлоидин прямо на блок. Блок с кусочком положить на 30 минут в 70-градусный спирт. Затем изготовляют срезы (блоки хранить нельзя). Срезы собирают в 96-градусном спирте. 9. Дистиллированная вода — 10—15 минут. 10. Вираж (при отсутствии реактивов не обязательно) в следующей смеси: роданистый аммоний 1,5 г, гипосульфит 1,5 г, дистиллированная вода 50 см3\ на 10 см3 смеси прибавляют 1 см3 1-процентного хлорного золота. Держать срезы до почернения. 11. Водопроводная вода 2 часа, дистиллированная вода 15 минут. 12. Дифференцируют 3—10 минут до просветления: маргаицево-кислый калий 2—3 кристалла, дистиллированная вода 50 см3, крепкая серная кислота 1 капля.
13. Без предварительной промывки переносят в 1-процентную щавелевую кислоту на 1—3 минуты. 14. Дистиллированная вода 5— 10 минут. 15. Для подкраски ядер (не обязательно) используют квасцовый кармин (1 час). 16. 70-лрадусный спирт 10 минут; 96-градусный спирт 10 минут; карбол-ксилол 10 минут. 17. Заключают в канадский бальзам.
Быстрый метод Гольджи (для нервной ткани, эмбрионов и очень молодых животных).
1. Кусочки фиксируют (в темной склянке, на дно которой кладут слой стеклянной ваты) в смеси из 40 см3 2,5—3,5-процеитного раствора двухромовокислого калия и 10 см3 1-процентной осмиевой кислоты в течение 3—5 дней (для фиксации берут кусочки не более 3 мм толщиной). Если материал держать в фиксаторе 2—3 дня, то окрашиваются клетки глии, если 6—9 дней, то импрегнируются нервные волокна. 2. Обсушивают объект фильтровальной бумагой. Помещают в 0,75-процентиый раствор азотнокислого серебра на 1—2 дня. Если раствор делается желтым и мутным, то его сменяют. 3. Промывают в 40-градусном спирте (3_4 раза сменить) 1—2 часа. 4. Проводят через 80-градусный спирт 1—2 часа. 5. 96-градусный спирт —3—4 часа. Затем быстро заливают в целлоидин или переводят (через 70-, 40-градусный
359
спирт в дистиллированную воду и режут на замораживающем микротоме. 6. Промывают срезы в 80-градуспом спирте (2 раза сменяя его). 7. Проводят через абсолютный спирт. 8. Кедровое масло. 9. Помещают срезы на покровное стекло, отсасывают фильтровальной бумагой остатки масла, наносят каплю канадского бальзама и, защищая от пыли, дают ей подсохнуть. Затем покровное стекло прикрепляют на предметном стекле, срезом вверх, чтобы избежать давления стекла, действующего разрушительно на импрегнацию. Если вместо бальзама употребляют цедакс, то им-прегнированные срезы могут быть накрыты покровными стеклами.
Ганглиозные клетки и их отростки окрашиваются в совершенно черный цвет; фон светлый.
Метод не всегда удается. В таких случаях следует изменять условия обработки и прежде всего варьировать сроки хромирования (п. 1). Вообще рекомендуется брать для обработки большое количество материала и ставить целые серии опытов. Варьируя при этом концентрацию фиксирующей жидкости, продолжительность содержания в ней, и применяя различную температуру, можно опытным путем определить для каждого объекта наиболее удачный вариант условий для последующей инпрегнации.
Для предотвращения образования на поверхности кусочков больших осадков серебра рекомендуется перед помещением в
1-процентное азотнокислое серебро погрузить их несколько раз в 10-процентный раствор желатины, которая образует оболочку, задерживающую осадки; после импрегнации желатина может быть удалена промыванием в теплой воде.
Модификация способа Гольджи, предложенная проф. Колосовым. Объекты, выдержанные надлежащее время (1—7 дней) в смеси двухромовокислого калия и осмиевой кислоты ('Д-процентный расТвор осмиевой кислоты, в котором растворено 3—5% двухромовокислого калия), переносятя, после обмывания их дистиллированной водой и легкого обсушивания, на пропускной бумаге не в слабый (0,75%) раствор азотнокислого серебра и не в чистый, как это обыкновенно делается, а в 2—3-процентный и притом содержащий к себе от 'Д ДО '/2 % осмиевой кислоты. В этом растворе объекты остаются 2—3 дня.
Модификация способа Гольджи, предложенная Тишуткиным. Тишуткин установил, что для различных органов нельзя применять шаблонно один и тот же способ. Всегда следует определить те условия, при которых в данном органе импрегнация хромовым серебром идет наиболее успешно. Само собой разумеется, что это далеко ие легкое дело. При изучении импрегнации нервов селезенки, Тишуткин получал наилучшне результаты, применяя для фиксирования смесь 5-процентного раствора двухромовокислого калия и 1-процентного раствора осмиевой кислоты (равные объемы нли в отношеннн 15 : 10). Маленькие, еще теплые, кусочки органа только что убитого животного быстро переносились в указанную смесь, подогретую до темпера-
Предыдущая << 1 .. 155 156 157 158 159 160 < 161 > 162 163 164 165 166 167 .. 214 >> Следующая