Книги
чёрным по белому
Главное меню
Главная О нас Добавить материал Поиск по сайту Карта книг Карта сайта
Книги
Археология Архитектура Бизнес Биология Ветеринария Военная промышленность География Геология Гороскоп Дизайн Журналы Инженерия Информационные ресурсы Искусство История Компьютерная литература Криптология Кулинария Культура Лингвистика Математика Медицина Менеджмент Металлургия Минералогия Музыка Научная литература Нумизматика Образование Охота Педагогика Политика Промышленные производства Психология Путеводители Религия Рыбалка Садоводство Саморазвитие Семиотика Социология Спорт Столярное дело Строительство Техника Туризм Фантастика Физика Футурология Химия Художественная литература Экология Экономика Электроника Энергетика Этика Юриспруденция
Новые книги
Янин В.Л. "Новгородские акты XII-XV Хронологический комментарий" (История)

Майринк Г. "Белый доминиканец " (Художественная литература)

Хусаинов А. "Голоса вещей. Альманах том 2" (Художественная литература)

Петров Г.И. "Отлучение Льва Толстого " (Художественная литература)

Хусаинов А. "Голоса вещей. Альманах том 1 " (Художественная литература)
Реклама

Микроскопическая техника - Роскин Г.И.

Роскин Г.И., Левинсон Л.Б. Микроскопическая техника — М.: Советская наука, 1957. — 469 c.
Скачать (прямая ссылка): microskopicheskayatehnika1957.djvu
Предыдущая << 1 .. 19 20 21 22 23 24 < 25 > 26 27 28 29 30 31 .. 214 >> Следующая

МЕТОДЫ ПРИЖИЗНЕННОГО ОКРАШИВАНИЯ Общие замечания
Красители, обладающие минимальной токсичностью, так называемые витальные красители, применяются для выявления различных органоидов и анализа их изменений в цикле жизни кле-66
ток, а также для изучения разных физиологических явлений, в первую очередь явлений проницаемости к лабильности протоплазмы, и ее изменений под влиянием внешних и внутренних факторов.
Наблюдения над прижизненно окрашенными объектами обычно требуют предварительных ориентировочных опытов, 'так как для каждого объекта и каждого красителя необходимо подобрать-оптимальные концентрации и условия, при которых достигается наилучший эффект.
Кроме того, следует учесть влияние на витальное окрашивание различных факторов — температуры, лучистой энергии, наркотиков, кислот, щелочей и т. п. Многочисленные примеры такого рода влияний приведены в работе Насонова и Александрова (1940).
При окраске мелких водных животных, простейших, водорослей, бактерий краситель можно прибавлять непосредственно к среде, в которой живут эти организмы. При окраске объектов, культивируемых in vitro па агар-агаровых средах, краситель можно прибавлять к агар-агару.
Для окраски наземных животных краситель можно примешивать к пище, но в большинстве случаев его необходимо инъициро-вать. После внутрикожных и подкожных инъекций необходимо место инъекции подвергнуть легкому массажу, что способствует лучшему распространению красителя. При внутривенном введении красителя его доза должна быть меньше, чем при подкожном введении. Внутривенное введение красителя дает наиболее полное проникновение его в различные части исследуемого животного.
Прижизненная окраска кислыми красителями и некоторыми другими веществами
Трипановый синий — один из лучших кислых красителей для витального окрашивания; хорошо сохраняется в ткани при последующей фиксации объекта.
Для окраски растворяют 0,5 г красителя в 100 см3 дистиллированной воды или в физиологическом растворе, фильтруют и затем, если необходимо, кипятят 10 минут для стерилизации. Пользуются только свежими раствфами, так как давно приготовленный раствор красителя меняет свои коллоидальные свойства; повышается также его токсичность.
Краситель инъицируется подкожно, внутрибрюшинно или внутривенно. Лабораторным животным вводят подкожно примерно следующие дозы: мыши и лягушке — от 0,5 до 1 см3, кролику—¦ от 10 до 15 см3 на 1 кг веса.
Окрашивание наступает после первой инъекции и усиливается после повторных инъекций, которые можно производить с интервалами в 3—5 дней. Материал фиксируют через 24 часа после последней инъекции.
Для приготовления срезов на замораживающем микротоме небольшие кусочки ткани предварительно фиксируют в течение 20—¦
5* 61
.120 минут в 10-процентном формалине (формалин разводится на физиологическом растворе поваренной соли). Изготовленные срезы можно докрасить кармином или нейтральным красным (к 100 см3 0,1-процентного нейтрального красного прибавляют 2 см3 уксусной кислоты: окрашивают примерно 1 минуту).
Окрашенные срезы ополаскивают дистиллированной водой, осторожно обсушивают фильтровальной бумагой и переносят непосредственно в абсолютный спирт; затем проводят через ксилол и заключают в бальзам.
Если нужно приготовить парафиновые срезы, то кусочки ткани фиксируют б смесн: формалина 1 часть, насыщенного раствора сулемы 8,5 частей.
Для выявления митохондрий обрабатывают объект одним из специальных митохондриальных методов.
Очень хорошо сохраняет трипановый синий смесь «суза» (см. стр. 120). Кусочек фиксируют обычно от 1 до 24 часов (в зависимости от его толщины) и затем непосредственно переносят в 90-градусный спирт н далее заливают в парафин, как обычно. Срезы докрашивают кармином или квасцовым гематоксилином; при гематологических исследованиях срезы можно докрашивать полихромпой метиленовой синькой, по Романовскому, или метиловым зеленым — пиронином.
Исследования Ясвоина, Макарова, Глазунова и др. показали, что частички трипанового синего накопляются в клетках в зоне нахождения аппарата Гольджи; микротехнические детали даны в указанных исследованиях.
Для окраски клеток в культурах ткани применяется 0,5-процентный трипановый синий, приготовленный на физиологическом растворе; к культуре ткани прибавляют одну каплю раствора красителя. Окрашенные культуры фиксируют смесью «суза» 10— 20 минут, а затем докрашивают квасцовым кармином.
Прижизненно окрашенный материал можно подвергнуть, в зависимости от целей исследования, обработке по ряду других методов: декальцинации, импрегнации по Бильшовскому, окраске по Ван-Гизону и т. д. Таким образом можно изучить нормальный н патологический материал, пользуясь самыми разносторонними методами.
После инъекции любого витального красителя можно отметить интенсивную окраску близлежащих лимфатических узлов, затем окрашиваются купферовские метки печени, эндотелий капилляров костного мозга, ретикулярные клетки селезенки и лимфатических узлов, зобной железы и, наконец, при выделении красителя — отдельные участки почки. Для усиления эффекта окраски рекомендуется делать повторные инъекции с интервалами в пять дней: при этом весьма увеличивается окраска гистиоцитов различных отделов тела.
Предыдущая << 1 .. 19 20 21 22 23 24 < 25 > 26 27 28 29 30 31 .. 214 >> Следующая